2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:
  胃癌是世界五大常見(jiàn)腫瘤之一,其致死率位列第三[1-3]。在東亞地區(qū),胃癌是發(fā)病率最高的癌癥之一,每年約有70%的胃癌新發(fā)病例和死亡發(fā)生在東亞、東歐和南美,而中國(guó)就占到所有人數(shù)的42%[4-6]。中國(guó)是胃癌高發(fā)國(guó)家,胃癌在中國(guó)男性人群中的發(fā)病率僅次于肺癌,位列第二,在中國(guó)女性人群中居第四位[2]。近年來(lái),隨著人們衛(wèi)生條件的提高和飲食習(xí)慣的改善,胃癌的發(fā)病率有下降的趨勢(shì),但是由于胃癌具有高轉(zhuǎn)移和高復(fù)發(fā)率等特點(diǎn),導(dǎo)致其生

2、存預(yù)后情況差異很大,晚期胃癌的5年生存率仍低于20%。針對(duì)胃癌的傳統(tǒng)治療方法,如手術(shù)、放療、化療并未明顯改善胃癌病人的預(yù)后,因此迫切需要?jiǎng)?chuàng)新腫瘤治療手段。研究表明,一些基因可能對(duì)胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移具有調(diào)控作用[7],針對(duì)這些基因的靶向治療取得了一些進(jìn)步,但是由于腫瘤形成的異質(zhì)性,多種基因間的相互作用,以及靶向藥物載體的局限等原因,導(dǎo)致胃癌的靶向治療效果不佳。因此,迫切需要尋找新的治療靶點(diǎn),為胃癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的深入研究以及精準(zhǔn)醫(yī)療提

3、供可靠的理論依據(jù)。
  人滋養(yǎng)層細(xì)胞表面抗原2(human trophoblast cell surface antigen2,TACSTD2/Trop2/M1S1/GA733-1),位于染色體1q32[8]。Trop2最早發(fā)現(xiàn)在人滋養(yǎng)層細(xì)胞表面[9,10],是單跨膜蛋白,約36kDa,分為膜外區(qū)、跨膜區(qū)、膜內(nèi)區(qū)和一個(gè)磷酸化的胞質(zhì)尾[11]。Trop2能夠被腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-

4、α)轉(zhuǎn)化酶裂解為胞外域和胞內(nèi)域,胞內(nèi)域從跨膜區(qū)離開(kāi)后直接進(jìn)入胞漿或核內(nèi)從而發(fā)揮生物學(xué)作用[12]。Trop2主要在上皮組織腫瘤中高表達(dá),并能夠促進(jìn)腫瘤的惡性生物學(xué)行為[13]。本實(shí)驗(yàn)室自2009開(kāi)始對(duì)Trop2基因進(jìn)行研究,前期的實(shí)驗(yàn)表明,Trop2基因在乳腺癌、胰腺癌、宮頸癌中高表達(dá),但是關(guān)于Trop2基因?qū)ξ赴┑挠绊懮形匆?jiàn)報(bào)道。
  上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)現(xiàn)

5、象是指上皮細(xì)胞在正常生理和特定病理?xiàng)l件下向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象[14],在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[15],將腫瘤細(xì)胞重新編程,使其具有干細(xì)胞特性[16-18]。為了適應(yīng)腫瘤微環(huán)境的變化,在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的早期,腫瘤細(xì)胞就會(huì)發(fā)生很多表型的改變[19]。而正常的上皮組織多層細(xì)胞結(jié)構(gòu)不利于惡性腫瘤細(xì)胞的遷移與侵襲,腫瘤細(xì)胞為了獲得運(yùn)動(dòng)能力就要通過(guò)發(fā)生EMT變化而失去上皮表型(細(xì)胞間粘附、基頂極性以及非移動(dòng)性)和上皮細(xì)胞的表面標(biāo)志物,如E-鈣

6、黏附蛋白(E-cadherin),并得到間質(zhì)表型(可移動(dòng)性、侵襲能力以及抗凋亡能力)和間質(zhì)細(xì)胞的表面標(biāo)志物,如纖維連接蛋白(fibronectin)、波形蛋白(vimentin)等[20-22]。因此,EMT現(xiàn)象在腫瘤轉(zhuǎn)移的早期出現(xiàn)是非常重要和必不可少的。
  本課題首先應(yīng)用免疫組化技術(shù),通過(guò)830例臨床胃癌組織芯片分析Trop2與臨床病理因素、預(yù)后的相關(guān)性,評(píng)價(jià)Trop2作為胃癌靶向治療分子靶點(diǎn)的可行性;在第二部分的研究中我們分

7、別從體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)探討Trop2對(duì)胃癌惡性生物學(xué)行為的影響,發(fā)現(xiàn)Trop2在胃癌上具有促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖,抑制凋亡,并能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力;最后我們通過(guò)臨床標(biāo)本和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)Trop2的表達(dá)和間質(zhì)細(xì)胞表面標(biāo)志物vimentin的表達(dá)相關(guān)聯(lián),進(jìn)而利用體外實(shí)驗(yàn)闡明Trop2能夠介導(dǎo)β-catenin促進(jìn)vimentin的表達(dá),從而誘導(dǎo)胃癌EMT現(xiàn)象及侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
  研究目的:
  1.從胃癌臨床標(biāo)本、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)

8、和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)三個(gè)層次研究Trop2對(duì)胃癌惡性生物學(xué)行為的影響和Trop2作為胃癌新靶點(diǎn)的可行性。
  2.闡明Trop2可能通過(guò)調(diào)控β-catenin促進(jìn)vimentin的表達(dá),從而誘導(dǎo)胃癌EMT現(xiàn)象和侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
  研究方法:
  1.選擇41對(duì)胃癌組織和癌旁組織新鮮標(biāo)本,實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)Trop2mRNA的表達(dá)水平;用免疫組化方法檢測(cè)Trop2在830例胃癌組織芯片中的表達(dá)情況,并結(jié)合臨床病理資料分

9、析其臨床意義,探討Trop2的表達(dá)與胃癌臨床病理分期、預(yù)后等的關(guān)系。
  2.選擇Trop2高表達(dá)和低表達(dá)各兩株胃癌細(xì)胞系,分別敲減和過(guò)表達(dá)Trop2,CCK8法和平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞增殖,F(xiàn)ACS檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力變化。分別選用shRNA-NC和shRNA-Trop2穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株,制備裸鼠皮下成瘤模型,通過(guò)測(cè)量瘤體積和瘤重,比較Trop2敲減后對(duì)胃癌的抑制作用。
 

10、 3.免疫組化檢測(cè)EMT表面標(biāo)志物vimentin和Trop2在248例人胃癌組織及86例癌旁組織中的表達(dá)情況,分析兩個(gè)基因表達(dá)的關(guān)聯(lián),以及與胃癌轉(zhuǎn)移、生存預(yù)后等的相關(guān)性。
  4.檢測(cè)過(guò)表達(dá)或敲減Trop2后胃癌細(xì)胞上EMT表面標(biāo)志物(E-cadherin,vimentin和fibronectin)及β-catenin、goocecoid、snail等EMT轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)變化;TGF-β1誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞株EMT模型,檢測(cè)EMT模型

11、中Trop2和EMT轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)變化;免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Trop2和β-catenin間的相互作用;同時(shí)檢測(cè)Trop2,β-catenin,vimentin在胃癌細(xì)胞株,EMT模型細(xì)胞株,敲除Trop2的EMT模型細(xì)胞株上表達(dá)情況;激光共聚焦顯微鏡觀察β-catenin、vimentin在過(guò)表達(dá)/敲減Trop2胃癌細(xì)胞株、EMT模型細(xì)胞株上敲除Trop2后的表達(dá)變化情況,分析Trop2對(duì)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制。
  5.分別選用

12、shRNA-NC和shRNA-Trop2穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細(xì)胞株,注射裸鼠尾靜脈制備轉(zhuǎn)移瘤模型,5周后處死裸鼠,分離出肺組織,比較組別間肺組織的重量和轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)量,IHC檢測(cè)肺組織轉(zhuǎn)移瘤的Trop2、ki67、vimentin表達(dá)情況,分析Trop2對(duì)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響。
  研究結(jié)果:
  1.實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)41對(duì)人胃癌新鮮標(biāo)本和癌旁組織,結(jié)果顯示Trop2mRNA在胃癌組織中的表達(dá)比癌旁組織高2.32±1.44倍;免

13、疫組化檢測(cè)830例不同類(lèi)型的人胃癌組織芯片,結(jié)果顯示,Trop2在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織、慢性胃炎組織、低級(jí)別瘤變和高級(jí)別瘤變;胃癌中Trop2的表達(dá)與胃癌分化程度、TNM分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、幽門(mén)螺旋桿菌感染等相關(guān),Trop2高表達(dá)預(yù)示著胃癌病人的預(yù)后不良,提示Trop2可以作為一個(gè)新的胃癌分子靶點(diǎn)。
  2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Trop2能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖能力和克隆形成能力,并能減少胃癌細(xì)胞的凋亡數(shù)量

14、;過(guò)表達(dá)Trop2后,胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力增強(qiáng),敲減Trop2能抑制胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力;Trop2促進(jìn)胃癌細(xì)胞周期中S期所占比例明顯增多。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),敲減Trop2在體內(nèi)能明顯抑制腫瘤的增殖能力,抑瘤率達(dá)到50.40%。免疫組化結(jié)果顯示,和空載對(duì)照組的腫瘤組織相比,shRNA-Trop2組的腫瘤組織中Trop2表達(dá)量相對(duì)較低。結(jié)果提示Trop2對(duì)胃癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為具有促進(jìn)作用。
  3.免疫組化檢測(cè)248例胃

15、癌組織及86例癌旁組織中Trop2和vimentin的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,Trop2和vimentin的表達(dá)呈正相關(guān),Trop2和vimentin在胃癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織;胃癌組織中Trop2+/vimentin+表達(dá)和分化、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等相關(guān),Trop2+/vimentin+預(yù)示著胃癌病人的預(yù)后不良,提示胃癌中Trop2的表達(dá)可能和胃癌EMT現(xiàn)象有關(guān)。
  4.細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,western-blot和實(shí)

16、時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,Trop2可上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞表型vimentin和fibronectin,下調(diào)上皮細(xì)胞表型E-cadherin,同時(shí)上調(diào)EMT調(diào)控因子β-catenin; TGF-β1能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞系發(fā)生EMT現(xiàn)象,誘導(dǎo)7天后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,免疫熒光和實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示細(xì)胞E-cadherin表達(dá)量減少,vimentin和fibronectin表達(dá)量增加,證實(shí)EMT模型誘導(dǎo)成功;EMT模型組細(xì)胞Trop2表

17、達(dá)明顯增加,同時(shí)上調(diào)EMT調(diào)控因子β-catenin;免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)推測(cè)Trop2和β-catenin可在胞內(nèi)發(fā)生結(jié)合;Western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Trop2能通過(guò)上調(diào)β-catenin促進(jìn)胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT現(xiàn)象;激光共聚焦顯微鏡進(jìn)一步觀察到Trop2能通過(guò)促進(jìn)β-catenin核內(nèi)聚集,上調(diào)EMT表面標(biāo)志物vimentin的表達(dá)。提示Trop2能通過(guò)上調(diào)p-catenin促進(jìn)vimentin表達(dá),進(jìn)而誘導(dǎo)胃癌EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的

18、分子機(jī)制。
  5.在體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型中,敲減Trop2的胃癌細(xì)胞經(jīng)裸鼠尾靜脈注射后,肺部轉(zhuǎn)移瘤形成數(shù)量少于空載對(duì)照組;肺部轉(zhuǎn)移瘤組織的免疫組化結(jié)果顯示,Trop2敲減組的Trop2、vimentin和Ki67的表達(dá)量明顯少于空載對(duì)照組。
  研究結(jié)論:
  1.Trop2在胃癌組織高表達(dá),其高表達(dá)與胃癌分化、TNM分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和幽門(mén)螺旋桿菌感染有關(guān),并預(yù)示著胃癌病人的預(yù)后不良,提示Trop2可作為

19、治療胃癌的分子靶點(diǎn)。
  2.Trop2高表達(dá)可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖,抑制凋亡,促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲能力,以及細(xì)胞的有絲分裂能力。
  3.Trop2和vimentin在胃癌組織上共同高表達(dá),并呈正相關(guān);胃癌組織中Trop2+/vimentin+表達(dá)和分化、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等相關(guān),Trop2+/vimentin+預(yù)示著胃癌病人的預(yù)后不良,提示胃癌中Trop2的表達(dá)可能和胃癌EMT現(xiàn)象有關(guān)。
  4.Trop2能通

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