鮑曼不動桿菌OXA基因的檢測及ISAbal對其的影響.pdf

1、目的：鮑曼不動桿菌是一種條件致病菌，廣泛存在于自然界、醫(yī)院環(huán)境及人體皮膚表面，因其對外界環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)，現(xiàn)已成為院內(nèi)重要的條件致病菌之一。近年來隨著廣譜抗生素的過度使用，對β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖甙類、喹諾酮類乃至碳青霉烯類的多重耐藥、泛耐藥鮑曼不動桿菌在世界范圍內(nèi)均有報(bào)道，極易引起大規(guī)模流行，必須引起廣大醫(yī)療工作者的高度重視。
　　 為了解大連地區(qū)多重耐藥不動桿菌的流行情況、同源性及耐藥機(jī)制，為臨床用藥提供有力依據(jù)，并

2、且切實(shí)有效地控制院內(nèi)感染的發(fā)生，我們對2008年～2009年于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院及大連市第三人民醫(yī)院臨床分離的110株多重耐藥、泛耐藥鮑曼不動桿菌進(jìn)行同源性、OXA-碳青霉烯酶基因分布情況及插入序列1(ISAbal)對OXA-23基因表達(dá)情況的影響的探討，并對其耐藥機(jī)制進(jìn)行初步研究。
　　 方法：收集臨床分離的（其中92株來自大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，18株來自大連市第三人民醫(yī)院）多重耐藥、泛耐藥的鮑曼不動桿菌無重復(fù)株11

3、0株（其中對亞胺培南敏感株為14株；耐藥株為96株），標(biāo)本來源于痰、血、尿、分泌物等，其中主要為痰標(biāo)本。采用常規(guī)方法進(jìn)行菌種鑒定，K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。多重聚合酶鏈反應(yīng)(multiplex polymerase chain reaction， mPCR)擴(kuò)增OXA-23-like、OXA-24-like、OXA-51-like、OXA-58-like，并送至大連寶生物工程公司進(jìn)行序列測定；應(yīng)用腸桿菌科基因組內(nèi)重復(fù)序列ERIC-P

4、CR進(jìn)行同源性分析。選取不同來源的菌株用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction， PCR）方法對應(yīng)擴(kuò)增OXA-23和ISAbal-OXA-23（12株）；OXA-51和ISAbal-OXA-51基因（7株），并用大腸埃希菌TOP10作為感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化OXA-23、ISAbal-OXA-23，瓊脂稀釋法測定陽性菌株和轉(zhuǎn)化子TOP10(pGM-T-OXA)對亞胺培南的MIC值，并以大腸埃希菌ATCC25922和銅綠

5、假單胞菌ATCC27853作為質(zhì)控菌株。
　　 結(jié)果：110株菌株中檢測到單純OXA-23基因9株（其中對亞胺培南耐藥菌株為8株，耐藥率為7.27％）、單純OXA51基因12株（其中對亞胺培南耐藥菌株為8株，耐藥率為7.27%）、、單純OXA-58基因2株，（均對亞胺培南敏感）、同時(shí)攜帶OXA-23和OXA-51兩種基因83株（其中對亞胺培南耐藥菌株為78株，耐藥率為70.91%）；檢測到ISAbal-OXA-23基因(9株，陽

6、性率為75%)，未檢測到blaOXA-24、ISAbal-OXA-51基因；OXA-碳青霉烯酶基因廣泛存在于鮑曼不動桿菌中，主要以O(shè)XA-23(83.64%)、OXA-51(86.36%)為主，OXA-58(1.82)較為少見；110株鮑曼不動桿菌來自18個(gè)不同的克隆株，其中有一種類型的菌株爆發(fā)流行，占總實(shí)驗(yàn)菌株的46.36%，其它類型菌株散在發(fā)生；轉(zhuǎn)化子TOP10（pGMISAbal-OXA-23）MIC值為0.5、另一轉(zhuǎn)化子TOP1

7、0(pGMOXA-23) MIC值為0.125; TOP10(pGMOXA-51))MIC值為0.25，三者均未顯示對亞胺培南高水平耐藥的特性。
　　 結(jié)論：鮑曼不動桿菌在大連地區(qū)廣泛流行，OXA-碳青霉烯酶基因廣泛存在于鮑曼不動桿菌中，主要以O(shè)XA-23、OXA-51為主，OXA-58較為少見，尚未發(fā)現(xiàn)OXA-24;同時(shí)攜帶OXA-23和OXA-51兩種基因的鮑曼不動桿菌在臨床上較為多見；ISAbal位于OXA-23基因的上游