Syn和GAP-43在TMT致小鼠學(xué)習(xí)記憶功能損傷及恢復(fù)過(guò)程的作用研究.pdf

1、目的：探索生產(chǎn)性毒物三甲基氯化錫的中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性作用，通過(guò)一次性給予BALB/c小鼠一定劑量的TMT(i.p.)，研究TMT急性暴露對(duì)BALB/c小鼠的學(xué)習(xí)記憶損傷效應(yīng)，以及這種損傷的恢復(fù)過(guò)程。通過(guò)研究海馬和額皮質(zhì)中在突觸間信息傳遞過(guò)程中起重要作用的Syn和GAP-43分子表達(dá)情況，提出TMT對(duì)中樞神經(jīng)損傷及其損傷后恢復(fù)的可能機(jī)制。
　　方法：①SPF級(jí)8～9周齡雄性BALB/c小鼠，分為對(duì)照組和五個(gè)TMT劑量組(2.00，2.

2、25，2.50，2.75，3.00mg/kg體重)，每組8只。TMT組小鼠給予TMT溶液(i.p.)，對(duì)照組給予等體積的生理鹽水處理。通過(guò)TMT處理后，小鼠籠內(nèi)活動(dòng)表現(xiàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定TMT急性暴露劑量，在該劑量下小鼠活動(dòng)無(wú)明顯異常，但卻能夠引起小鼠學(xué)習(xí)記憶功能損傷。②將小鼠分為對(duì)照組(168h)和TMT組(168h)，研究TMT急性暴露對(duì)BALB/c小鼠學(xué)習(xí)記憶功能損傷后的恢復(fù)情況。③通過(guò)western blot實(shí)驗(yàn)檢

3、測(cè)BALB/c小鼠TMT急性暴露后24h和168h其海馬和額皮質(zhì)中Svn及GAP-43表達(dá)變化情況。④采用組織病理切片技術(shù)，觀察TMT急性暴露對(duì)小鼠海馬的損傷作用。
　　結(jié)果：
　?、?TMT急性暴露24h后，TMT2.00，2.25mg/kg組BALB/c小鼠籠內(nèi)活動(dòng)均未見異常表現(xiàn)；TMT2.50，2.75，3.00mg/kg組小鼠攝食及活動(dòng)量減少，出現(xiàn)顫抖現(xiàn)象，部分小鼠尾部有咬傷痕跡。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)表明，TMT暴

4、露后24h，從第3次訓(xùn)練開始，TMT2.25，2.50，2.75mg/kg組小鼠較對(duì)照組小鼠逃逸潛伏期顯著延長(zhǎng)(p<0.01)。TMT2.00mg/kg組小鼠僅在第4次(p<0.01)，5次(p<0.05)，7次(p<0.01)訓(xùn)練逃逸潛伏期與對(duì)照組有顯著性差異。BALB/c小鼠在TMT3.00mg/kg暴露后24h，喪失游泳能力，無(wú)法進(jìn)行MWM實(shí)驗(yàn)。因此，確定BALB/c小鼠的TMT急性暴露劑量為2.00mg/kg體重。
　　②

5、 TMT暴露前至暴露后168h，小鼠活動(dòng)量及進(jìn)食量先減少后增多，體重先下降后上升；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)表明，TMT暴露后168h小鼠經(jīng)過(guò)訓(xùn)練，逐漸能夠找到隱藏的平臺(tái)，其逃逸潛伏期除第4訓(xùn)練外與對(duì)照組均無(wú)顯著性差異(p<0.05)。
　　③ TMT2.25 mg/kg暴露后24h，TMT組小鼠海馬和額皮質(zhì)中Syn表達(dá)較對(duì)照組顯著降低(p<0.01)。海馬中Syn表達(dá)水平減少至對(duì)照組的80.24±18.07％(p<0.01)；額皮質(zhì)

6、中Syn表達(dá)水平減少至對(duì)照組的73.78±16.97％(p<0.01)。GAP-43表達(dá)較對(duì)照組則均無(wú)顯著性差異。TMT2.25 mg/kg暴露后168h，TMT組小鼠海馬中和額皮質(zhì)中Syn表達(dá)較對(duì)照組均升高，但無(wú)顯著性差異。海馬中GAP-43表達(dá)水平升高至對(duì)照組的119.68±15.98％(p<0.01)；額皮質(zhì)中GAP-43表達(dá)水平升高至對(duì)照組的129.31±13.38％(p<0.01)。
　?、?BALB/c小鼠在TMT2.

7、25 mg/kg暴露后24h，其海馬未見明顯異常。而當(dāng)TMT3.00 mg/kg暴露24小時(shí)后，其海馬切片中DG區(qū)顆粒細(xì)胞出現(xiàn)壞死，但CA1區(qū)和CA3區(qū)椎體細(xì)胞均形態(tài)未見明顯異常。在TMT2.25 mg/kg暴露后48h，小鼠海馬DG區(qū)出現(xiàn)大量顆粒細(xì)胞染色質(zhì)固縮，并可見神經(jīng)元細(xì)胞缺失形成的空洞，CA3區(qū)椎體細(xì)胞則明顯腫脹，CA1區(qū)椎體細(xì)胞形態(tài)未見明顯異。在TMT2.25 mg/kg的觀察時(shí)間延至168小時(shí)后，小鼠海馬切片DG區(qū)可見部分顆

8、粒細(xì)胞染色質(zhì)固縮及神經(jīng)元細(xì)胞缺失形成的空洞，CA1區(qū)和CA3區(qū)椎體細(xì)胞均形態(tài)未見明顯異常。
　　結(jié)論：TMT急性暴露劑量為2.25 mg/kg(i.p.)，在暴露后24h時(shí)可引起B(yǎng)ALB/c小鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能損傷，并引起處理小鼠海馬和額皮質(zhì)中Syn表達(dá)水平降低；而這種損傷作用在TMT暴露后168h減弱，同時(shí)其海馬和額皮質(zhì)中GAP-43表達(dá)上升。提示我們TMT導(dǎo)致的學(xué)習(xí)記憶功能損傷可能與Syn表達(dá)水平降低有關(guān)，而GAP-43在TM