虎眼萬年青和刺五加多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)解析及活性研究.pdf

1、本文以虎眼萬年青和刺五加為原料，對虎眼萬年青多糖和刺五加多糖的提取、分離純化、理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)的初步分析、抗氧化活性和免疫活性等方面進行了較為系統(tǒng)的研究。得到結(jié)論如下：
　　 ⑴采用回流提取、超聲提取、超聲酶解提取、微波輔助提取虎眼萬年青多糖，優(yōu)化出回流提取最優(yōu)工藝條件為：溶劑原料比為12 mL/g、提取時間3 h、提取次數(shù)3次、提取溫度80℃；超聲提取最優(yōu)工藝條件為：提取時間為60min、超聲次數(shù)為3次、超聲功率為400W、溶劑

2、原料比為40mL/g；超聲酶解法提取工藝條件為：復合酶中纖維素酶、果膠酶、木瓜蛋白酶的最佳配比為：9:120:10。超聲酶解提取最優(yōu)參數(shù)為：提取溫度50℃、提取時間90min、酶解pH 4、提取3次；微波輔助提取最優(yōu)工藝條件為：提取溫度為140℃，溶劑原料比40mL/g，提取時間為5 min，提取次數(shù)3次。
　　 虎眼萬年青經(jīng)超聲提取、乙醇沉淀分級、Sevag法脫蛋白、脫色、透析去除小分子及鹽類物質(zhì)，得到虎眼萬年青粗多糖；粗多糖

3、采用EDAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱色譜分離純化，得到OCAP-1、OCAP-2、OCAP-3、OCAP-4、OCAP-5五個多糖組分，其中高得率、高活性的OCAP-3經(jīng)Sephadex G-75凝膠過濾柱色譜進一步分離純化，得到虎眼萬年青單一多糖OCAP-3-0。利用氣相色譜和毛細管電泳法測定OCAP-3-0主要由木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖四種單糖組成，高效液相凝膠色譜法測得其分子量為27300Da，硫酸-

4、咔唑法測得其糖醛酸含量為5.78％，紅外光譜顯示其具有多糖的特征吸收峰?？寡趸钚詫嶒灲Y(jié)果表明，虎眼萬年青各多糖組分均具有抗氧化作用，對羥基自由基、超氧陰離子自由基、DPPH.都有較強的清除活性，其清除率隨著多糖濃度的增加而增加。對脾細胞增殖的影響結(jié)果顯示，虎眼萬年青各多糖組分(OCAP-1、OCAP-2、OCAP-3、OCAP-4、OCAP-5、OCAP-3-0)與空白對照組比較，各多糖組分對脾細胞增殖均具有一定的促進作用；與ConA

5、對照組比較，除了OCAP-1，其余多糖組分對脾細胞增殖都有顯著性促進作用
　　 ⑵采用超聲提取、超聲復合酶解提取、高壓蒸煮提取刺五加多糖，優(yōu)化出超聲提取最優(yōu)工藝條件為：提取溫度為70℃，提取時間為90min，超聲功率為500W，提取次數(shù)為3次；超聲酶解法提取工藝條件為：纖維素酶1.5％，果膠酶1.5％，木瓜蛋白酶為0.5％；超聲酶解提取最優(yōu)參數(shù)為：取溫度為70℃，提取時間為30min，溶液pH值為7，超聲功率為500W；高壓蒸煮

6、提取最優(yōu)工藝條件為：提取溫度為120℃，提取時間為60min，溶劑原料比20mL/g，提取次數(shù)3次。
　　 刺五加經(jīng)超聲酶解提取、乙醇沉淀分級、Sevag法脫蛋白，脫色，透析去除小分子及鹽類物質(zhì)，得到刺五加粗多糖；粗多糖采用 EDAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱色譜分離純化，得到ASP-1、ASP-2、ASP-3，其中高得率、高活性ASP-2經(jīng)Sephadex G-75凝膠過濾柱色譜進一步分離純化，得到刺五

7、加單一多糖ASP-2-0.氣相色譜測定ASP-2-0主要由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、果糖、葡萄糖、半乳糖六種單糖組成，高效液相凝膠色譜法測定其分子量為13600Da，硫酸-咔唑法測定糖醛酸含量為7.45％，紅外光譜圖顯示其具有多糖的特征吸收峰?？寡趸钚詼y試表明，刺五加多糖各組分均具有抗氧化作用，對羥基自由基、超氧陰離子自由基、DPPH.都有較強的清除活性，其清除率隨著多糖濃度的增加而增加。對脾細胞增殖的影響實驗結(jié)果顯示，刺五加各多糖組分