狗肝菜多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)解析及保肝活性研究.pdf

1、狗肝菜為爵床科植物狗肝菜屬狗肝菜(Dicliptera chinensis L. Ness)的干燥全草，主產(chǎn)于福建、臺(tái)灣、廣東、廣西等地。味甘、苦，性微寒。具有清熱解毒、涼血止血、生津、利尿等功效。常用于感冒發(fā)熱，暑熱煩渴，乳蛾，疔瘡，便血，尿血，小便不利等癥。本實(shí)驗(yàn)室的前期工作表明，狗肝菜多糖保肝作用的活性部位為相對(duì)分子質(zhì)量小于6000 Da的多糖部位，因此本文對(duì)狗肝菜多糖該活性部位進(jìn)行分離純化，并對(duì)分離得到的均一多糖組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析

2、以及保肝活性研究。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1.對(duì)狗肝菜多糖的活性部位分子量小于6000 Da部位進(jìn)行分離純化。采用二乙胺基乙基纖維素（DEAE-52）離子交換層析法和葡聚糖凝膠G-50層析法，通過(guò)凝膠滲透色譜法進(jìn)行純度鑒定，最終得到兩個(gè)均一多糖組分 P2B和P4B。這兩個(gè)組分采用凝膠滲透色譜法進(jìn)行了相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定，其峰位相對(duì)分子質(zhì)量分別為4925 Da、12055 Da。
　　2.對(duì)狗肝菜多糖均一組分P2B和P4B進(jìn)行結(jié)

3、構(gòu)解析。結(jié)果顯示：P2B含有5種單糖，分別是鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，主鏈單糖殘基為鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，末端殘基和分支單糖殘基為鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖，該多糖含有1→6鍵型或分枝末端基與 l→2或1→4鍵型，此兩種鍵型比例大約為1:1。P4B含有4種單糖，分別是鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，其主鏈單糖殘基為鼠李糖、葡萄糖和半乳糖，末端殘基和分支單糖殘基為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖。該多糖

4、含有1→6鍵型或分枝末端基與l→2或1→4鍵型，此兩種鍵型比例大約為5:6。
　　3.對(duì)狗肝菜多糖均一組分P2B和P4B對(duì)CCl4致L-02肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用進(jìn)行研究。結(jié)果如下：
　?。?）MTT檢測(cè)顯示當(dāng)CCl4的濃度為6 mmol/L時(shí)，L-02細(xì)胞存活率在60％-70%之間，此濃度可較好地顯示 CCl4損傷與保護(hù)因子作用的差異。因此，可選用6 mmol/L CCl4作用24 h作為L(zhǎng)-02肝細(xì)胞的損傷模型。
　

5、?。?）CCl4模型組細(xì)胞的存活率明顯降低，僅為空白組的62.16±1.62%，狗肝菜多糖P2B和P4B高劑量組（0.5mg/mL）、中劑量組（0.25 mg/mL）以及低劑量組（0.125 mg/mL）均能夠顯著提高CCl4致L-02肝細(xì)胞損傷的細(xì)胞存活率(P＜0.01)，且均存在劑量效應(yīng)關(guān)系，即多糖劑量越高，L-02肝細(xì)胞的存活率越高。
　　（3）CCl4模型組培養(yǎng)上清的 ALT和AST水平均較空白組明顯升高（P＜0.01）。

6、各多糖處理組中的 ALT與 AST水平均比CCl4模型組降低，其中 P2B高、中劑量組及P4B高、中劑量組中的 ALT與AST水平與CCl4模型組統(tǒng)計(jì)學(xué)上存在非常顯著性差異（P＜0.01）。
　?。?）CCl4模型組細(xì)胞中丙二醛(MDA)含量明顯升高（P＜0.01），超氧化物歧化酶(SOD)的活性明顯降低（P＜0.01）。P2B和P4B各劑量組的 MDA含量較 CCl4模型組明顯降低（P＜0.01），并存在劑量效應(yīng)關(guān)系，其中 P2