靈芝肽的分離純化及其保肝作用研究.pdf

1、研究前期工作已對(duì)靈芝肽進(jìn)行了初步分離，并且證實(shí)靈芝肽是一種較好的抗氧化活性物質(zhì)。為尋求靈芝肽最佳分離純化條件并探討其保肝功能，該實(shí)驗(yàn)采用配位色譜法、離子交換柱層析、RP-HPLC，以靈芝樣對(duì)羥基自由基的抑制率為抗氧化活性指標(biāo)，對(duì)靈芝肽進(jìn)行了進(jìn)一步分離純化；采用氨基酸分析儀、分光光度計(jì)、電位測(cè)定儀比較了靈芝肽各組分的抗氧化能力和還原能力；采用生化分析儀、顯微鏡研究了混合靈芝肽(MGLP)對(duì)四氯化碳、乙醇誘導(dǎo)肝損傷小鼠的輔助保護(hù)作用。結(jié)果如

2、下： 1.將發(fā)酵靈芝粉經(jīng)水提、過(guò)分子量為10000Da的超濾膜后得小分子混合物GLL。將未脫色GLL采用SephadexG-25、SephadexG-15進(jìn)行分離，均未能將肽類物質(zhì)與色素分開(kāi)；將GLL經(jīng)活性炭脫色后采用SephadexG-25、SephadexG-15分離，肽類物質(zhì)無(wú)法與小分子糖類分開(kāi)。采用配位色譜Cu2+-SephadexG-25柱可以將脫色GLL中肽類物質(zhì)與氨基酸很好地分離，得GLP-Ⅰ、GLP-Ⅱ、GLAA

3、三個(gè)峰。氨基酸分析表明GLP-Ⅰ、GLP-Ⅱ、GLAA中氨基酸總量分別為88.33％、91.01％、93.18％，GLP-Ⅰ與GLP-Ⅱ中主要以酸性氨基酸為主，GLP-Ⅰ中酸性氨基酸占氨基酸總量的39.3％；GLP-Ⅱ中酸性氨基酸含量占為總氨基酸含量的71.52％。GLP-Ⅱ?yàn)楦逨值寡肽，GLAA為高F值混合氨基酸。DEAE-Cellulose陰離子交換樹(shù)脂在可以將GLP-Ⅱ分為三個(gè)級(jí)份：GLP-ⅡA、GLP-ⅡB、GLP-ⅡC；GLP

4、-ⅡC進(jìn)一步經(jīng)RP-HPLC分離后得2個(gè)峰。 2.MGLP在Cu2++抗壞血酸誘導(dǎo)卵磷脂脂質(zhì)氧化體系及非脂質(zhì)體系中抑制氧化能力均高于GLPⅠ、GLPⅡ和GLAA，在卵磷脂脂質(zhì)氧化體系中其IC50為0.984mg/ml;其還原作用也優(yōu)于GLPⅠ、GLPⅡ和GLAA。 3.MGLP對(duì)小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用： a)灌胃MGLP后，CCl4誘導(dǎo)肝損傷小鼠體重明顯增加，小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST

5、)活力，丙二醛(MDA)含量均有所下降。當(dāng)MGLP劑量為400mg/kg.bw和800mg/kg.bw時(shí)，血清中ALT及AST活力顯著低于CCl4模型對(duì)照組，肝組織病理學(xué)為陽(yáng)性，MGLP對(duì)四氯化碳引起的肝損傷有輔助保護(hù)作用。 b)MGLP可使乙醇誘導(dǎo)肝損傷組小鼠血清中還原型谷胱甘肽(GSH)含量明顯升高，丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)含量明顯降低。當(dāng)劑量為800mg/kg.bw時(shí)，血清中MDA和TG含量顯著低于乙醇模型對(duì)照組