血漿尿嘧啶核苷測定方法的建立及胞磷膽堿鈉片生物等效性研究.pdf

1、目的：1.建立測定人血漿中尿嘧啶核苷濃度的高效液相色譜法；2.進行試驗制劑胞磷膽堿鈉腸溶片與市售參比制劑胞磷膽堿鈉膠囊的單劑口服雙交叉兩周期人體生物等效性試驗，評價兩制劑的生物等效性，為新藥報批及其臨床應用提供試驗依據。
　　 方法：1.色譜條件：色譜柱為Phenomenex kinetex C18(100×4.6mm，2.6μm)；流動相：0.05 M磷酸鹽緩沖液(1000 mL水中加入磷酸二氫鉀6.8044 g，用磷酸調至p

2、H3.5)：甲醇(98:2)；流速：0.8 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：260 nm；進樣量：20μL。選用阿莫西林作為內標。
　　 2.胞磷膽堿鈉片在健康志愿者體內的生物等效性研究，24名健康男性志愿者按體重排序后隨機分為兩組，于試驗前一天晚10時后禁食，試驗當日晨抽取空白血樣后，立即空腹口服試驗制劑(胞磷膽堿鈉腸溶片)或參比制劑(胞磷膽堿鈉膠囊)600 mg，于給藥前和給藥后0.5、1.0、1.5、2.0、3.

3、0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h取肘靜脈血4 mL，立即移入肝素抗凝管中，靜置，4℃5000 rpm低溫離心5min，取血漿分雙份于-20℃貯存?zhèn)錅y。一周后交叉重復上述試驗。
　　 3.采用高效液相色譜(HPLC)法測定胞磷膽堿鈉代謝產物尿嘧啶核苷經時血濃度。尿嘧啶核苷血濃度-時間數據經《DAS2.0》實用藥代動力學計算程序處理，得試驗制劑和參比制劑胞磷膽堿鈉代謝產物尿嘧啶核苷藥代動力學參數；根據試驗制

4、劑和參比制劑AUC0-t計算試驗制劑的相對生物利用度。同時對主要藥代動力學參數進行方差分析、雙單側t檢驗和(1-2α)置信區(qū)間分析，評價試驗制劑和參比制劑的生物等效性。
　　 結果：1.血漿中尿嘧啶核苷的最低檢測限低于50 ng·mL-1，該方法在0.05～2μg/mL范圍內線性關系良好，標準曲線方程為Y=2.10X+0.57(r=0.9928，n=7)，低、中、高濃度(0.1μg·mL-1，0.5μg·mL-1和1.6μg·m

5、L-1)尿嘧啶核苷和內標(10μg·mL-1)的提取回收率分別為99.66％、102.09％、95.57％和81.52％；低、中、高濃度尿嘧啶核苷血漿樣品的日內、日間變異(RSD)均小于15％，血漿樣品室溫放置8h，長期冷凍7天、14天，反復凍融2次穩(wěn)定性良好。
　　 2.單劑量口服胞磷膽堿鈉實驗制劑和參比制劑后，血漿尿嘧啶核苷的Cmax分別為(1.956±0.402)μg·mL-1和(2.070±0.619)μg·mL-1，t

6、1/2分別為(4.393±2.526)h和(4.857±4.503)h，Tmax分別為(3.354±1.118)h和(3.688±1.082)h，AUC0-t分別為(12.774±3.222)μg·mL-1·h和(13.992±3.953)μg·mL-1·h，AUC0～∞分別為(16.015±5.647)μg·mL-1·h和(17.198±6.672)μg·mL-1·h。
　　 結論：1.建立的測定人血漿中尿嘧啶核苷濃度的高效液