慢性間歇缺氧誘導(dǎo)小鼠海馬損傷的神經(jīng)炎癥機制及藥物干預(yù)的研究.pdf

1、1.拮抗P2X7受體改善慢性間歇缺氧小鼠海馬損傷、認知受損的研究
　　目的：睡眠呼吸暫停綜合征可引起患者認知障礙，但其具體機制尚不清楚。慢性間歇缺氧是睡眠呼吸暫停最重要的特征，此缺氧模型常用于對睡眠呼吸暫停綜合癥的研究。P2X7受體是一種常見于多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的嘌呤受體，在腦組織中廣泛表達。本實驗擬研究P2X7受體在慢性間歇缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)損傷中的作用及其可能的通路。
　　方法：實驗使用8周齡C57BL/6小鼠。為探究P2X7

2、受體表達的變化，每個時間點（第3,7,14,21天）采用8只小鼠，隨機分為缺氧組（氧濃度21％~6%，40循環(huán)/小時，一天8小時）和常氧組（氧濃度21%，其余條件一致）2組。使用蛋白質(zhì)印跡法和實時定量熒光PCR檢測P2X7受體。之后在為期21天的BBG（P2X7受體拮抗劑）實驗中，采用48只小鼠，隨機分為慢性間歇缺氧+生理鹽水組，慢性缺氧+BBG組，常氧+生理鹽水組，常氧+BBG組4組。使用Morris水迷宮實驗檢測小鼠的認知功能。使用

3、蛋白質(zhì)印跡法檢測NFκB和NOX2水平。使用實時定量熒光PCR測量腫瘤壞死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-1β)，IL-18，IL-6的水平。使用相應(yīng)試劑盒檢測丙二醛和超氧化物歧化酶水平。用蘇木精-伊紅染色法和TUNEL染色法檢測神經(jīng)細胞損傷和凋亡。
　　結(jié)果：實驗中發(fā)現(xiàn)P2X7受體mRNA于間歇缺氧3天后開始增高，持續(xù)到21天，P2X7受體蛋白水平于間歇缺氧第7天開始增高持續(xù)到21天。在BBG實驗中，慢性間歇缺氧小鼠在

4、Morris水迷宮的表現(xiàn)差于其他組小鼠，表現(xiàn)為潛伏期更長，在平臺的穿越次數(shù)更少，目標象限停留時間更少。BBG處理后認知功能改善。慢性間歇小鼠中NFκB和NOX2升高，使用BBG后其水平下降。慢性間歇小鼠中TNF-α，IL-1β，IL-18，IL-6的水平均高于正常組。BBG處理CIH組炎癥因子的水平下降。慢性間歇小鼠中氧化應(yīng)激水平均高于正常組。BBG可使MDA下降，SOD增高。慢性間歇缺氧小鼠的海馬神經(jīng)細胞出現(xiàn)細胞腫脹，核聚縮等細胞退化

5、，細胞凋亡的改變,BBG使細胞受損改善。
　　結(jié)論：拮抗P2X7受體可以改善間歇缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥、氧化應(yīng)激、神經(jīng)損害和空間認知能力損傷，提示P2X7受體可能為睡眠呼吸暫停綜合征所致認知缺損的新靶點，為今后藥物的研究提供更多的選擇。
　　2.阿托伐他汀對慢性間歇缺氧小鼠海馬損傷及Toll樣受體4信號通路影響的研究
　　目的：海馬神經(jīng)損傷為睡眠呼吸暫停導(dǎo)致的認知損害的重要原因。阿托伐他汀是一種廣泛使用的降脂藥物，有文獻報

6、導(dǎo)其能改善認知損傷。TLR4受體是一種參與天然免疫的Toll受體，近期發(fā)現(xiàn)其在阿爾茨海默病等多種神經(jīng)疾病中發(fā)揮作用。本實驗擬研究阿托伐他汀是否能改善慢性間歇缺氧所致小鼠海馬神經(jīng)細胞損傷，以及 TLR4及其下游通路是否參與其中。
　　方法：實驗使用40只8周齡C57BL/6小鼠。小鼠隨機分為慢性間歇缺氧（氧濃度21%-6%，40循環(huán)/小時，一天8小時）組，慢性間歇缺氧+阿托伐他汀組，常氧組，常氧+阿托伐他汀組4組。使用蛋白質(zhì)印跡法和

7、實時定量熒光PCR檢測TLR4受體及其下游通路蛋白MYD88和TRIF。使用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測腫瘤壞死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-β)。使用相應(yīng)試劑盒檢測丙二醛和超氧化物歧化酶水平。使用用蘇木精-伊紅染色法和TUNEL染色法檢測神經(jīng)細胞損傷和凋亡。
　　結(jié)果：慢性間歇小鼠中TLR4受體，MYD88和TRIF水平升高，阿托伐他汀的使用降低TLR4受體及下游通路蛋白的表達。慢性間歇缺氧海馬和血清中TNF

8、-α，IL-1β水平均高于正常組，阿托伐他汀處理使炎癥因子水平下降。慢性間歇小鼠中氧化應(yīng)激水平高于正常組。阿托伐他汀可使SOD增高，MDA下降。慢性間歇缺氧小鼠的海馬神經(jīng)細胞出現(xiàn)細胞腫脹，核聚縮等細胞退化的改變，神經(jīng)細胞凋亡增加，阿托伐他汀使細胞受損改善。
　　結(jié)論：阿托伐他汀可以改善慢性間歇缺氧所致海馬神經(jīng)損傷，其作用可能涉及TLR4/MYD88和TLR4/TRIF通路。
　　3.鄰香草醛對慢性間歇缺氧小鼠海馬損傷及TOL

9、L樣受體2信號通路影響的研究
　　目的：海馬神經(jīng)損傷為睡眠呼吸暫停導(dǎo)致認知損害的主要原因。TLR2受體是一種在腦缺血等多種神經(jīng)疾病中發(fā)揮重要作用的I型受體，在OSAS患者中表達亦有增高。鄰香草醛為新近發(fā)現(xiàn)的TLR2通路抑制劑，且具有抗氧化等作用。本實驗擬研究鄰香草醛是否能通過抑制TLR2通路改善慢性間歇缺氧所致小鼠海馬神經(jīng)細胞損傷。
　　方法：實驗使用40只8周齡C57BL/6小鼠。小鼠隨機分為慢性間歇缺氧（氧濃度21%-6

10、%，40循環(huán)/小時，一天8小時）組，慢性間歇缺氧+鄰香草醛組，常氧組，常氧+鄰香草醛組4組。使用免疫共沉淀和蛋白質(zhì)印跡法檢測TLR2受體與其下游通路蛋白MYD88相互作用，使用蛋白質(zhì)印跡法檢測NFκB激活狀態(tài)。使用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢（ELISA）測腫瘤壞死因子α（TNF-α），白介素-1β(IL-β)。使用相應(yīng)試劑盒檢測丙二醛和超氧化物歧化酶水平。使用用免疫組織化學方法檢測小膠質(zhì)細胞的表達，使用TUNEL染色法檢測細胞凋亡。
　

11、　結(jié)果：慢性間歇小鼠中 TLR2/MYD88通路被激活，鄰香草醛的使用抑制 TLR2通路激活及下游NFkB的表達。慢性間歇缺氧海馬和血清中TNF-α，IL-1β水平均高于正常組，鄰香草醛的處理使炎癥因子水平下降。慢性間歇小鼠中氧化應(yīng)激水平高于正常組。鄰香草醛可使MDA下降，SOD增高。慢性間歇缺氧小鼠的海馬小膠質(zhì)細胞聚集增加，活化程度較高，神經(jīng)細胞出現(xiàn)細胞腫脹，核聚縮等細胞退化的改變，神經(jīng)細胞凋亡增加，鄰香草醛可以減少小膠質(zhì)細胞的聚集，