溫腎方對亞臨床甲減大鼠血管損傷的影響的實驗研究.pdf

1、目的:觀察溫腎方對亞臨床甲減大鼠血管損傷的影響并探討造成這種影響的機理;
　　 方法:將健康6周齡SPF級Wistar大鼠50只隨機抽取8只設(shè)為正常對照組。而將正常對照組以外的大鼠行“甲狀腺全切+術(shù)后皮下注射L-T4”法制備亞臨床甲減大鼠模型,造模成功后將這些大鼠隨機分為模型組,中藥小劑量組,西藥組,中藥大劑量組。然后對此四組的大鼠行連續(xù)30天的灌胃治療,然后
　　 1.采用化學(xué)發(fā)光法檢測大鼠血清甲功三項的含量,采用El

2、isa法檢測肝臟組織TT3的含量;
　　 2.運用東芝DBA-120型全自動生化分析儀對所有實驗大鼠的血脂四項(TC、TG、LDL-C、HDL-C)的濃度進行檢測;
　　 3.對大鼠的肝組織中HMG-CoA還原酶及血清中MCP-1,ET-1的水平采用Elisa法進行檢測;
　　 4.取出大鼠胸主動脈2cm,勻漿,取其上清液,提取總RNA,利用RT-PCR技術(shù)進行基因片段的體外擴增,擴增產(chǎn)物通過電泳后,通過對其電泳

3、照片上灰度值進行檢測,比較其LOX-1mRNA的相對含量;
　　 5.于灌胃結(jié)束后的第二天在實驗大鼠身上取材,取出大鼠胸主動脈標本,制備病理標本,通過光鏡和電鏡觀察實驗大鼠胸主動脈顯微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu);
　　 結(jié)果:1.與正常組比較,模型組大鼠血清TSH水平明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較,中藥小劑量組TSH水平較明顯降低(p＜0.05);西藥組TSH水平明顯降低(P＜0.05);中藥大劑量組TSH水平明顯降低(p＜

4、0.05)。各組之間FT3,FT4水平無明顯差異(P＞0.05)模型組肝臟訂,含量,與正常組比較,有明顯降低(P＜0.05);中藥大劑量組,中藥小劑量組,西藥組肝臟TT3含量均較模型組明顯提高(P＜0.05),而其中尤以中藥大劑量組的提高最為明顯;
　　 2.中藥大劑量組,與對照組比較,血漿TC,TG,LDL-C,HDL-C水平?jīng)]有明顯差異(p＞0.05);,與中藥小劑量組比較,血脂四項的水平?jīng)]有明顯差異(P＞0.05);與西藥

5、組比較,沒有明顯差異(P＜0.05);與模型組比較,則TC,TG,LDL-C水平明顯降低(P＜0.05),HDL-C水平明顯提高(P＜0.05)。模型組,與對照組比較,TC,TG,LDL-C水平明顯升高(P＜0.05),而HDL-C水平明顯降低(P＜0.05);
　　 3.實驗結(jié)果通過統(tǒng)計學(xué)處理之后,發(fā)現(xiàn)中藥大劑量組,與對照組比較,肝臟HMG-CR以及血清MCP-1,ET-1的水平?jīng)]有明顯差異(p＞0.05);,與中藥小劑量組比

6、較,肝臟HMG-CR以及血清MCP-1,ET-1的水平?jīng)]有明顯差異(P＞0.05);與西藥組比較,則沒有明顯差異(P＞0.05);與模型組比較,則肝臟HMG-CR以及血清MCP-1,ET-1水平明顯降低,有明顯差異(P＜0.05)。
　　 4.對空白對照組,中藥大劑量組,西藥組,中藥小劑量組,模型組的大鼠血管LOX-1的mRNA的RT-PCR產(chǎn)物進行電泳后。通過對其中心區(qū)域的灰度值進行掃描分析,然后分別將對應(yīng)組別自己的LOX-1

7、的mRNA的電泳產(chǎn)物與自己所屬的組別的beta-Actin的mRNA的電泳產(chǎn)物的灰度值進行比較,計算兩者之間數(shù)值的比值。結(jié)果顯示,與正常對照組比較,模型組的LOX-1的mRNA的相對含量明顯上升(P＜0.05);與模型組的LOX-1的mRNA的相對含量比較,中藥大劑量組,西藥組,中藥小劑量組的LOX-1的相對含量均下降明顯(P＜0.05),而特別是以中藥大劑量組的下降最為明顯;
　　 5.顯微結(jié)構(gòu)方面主要表現(xiàn)在動脈內(nèi)膜失去光滑狀

8、態(tài),內(nèi)皮細胞受到損傷,排列失去正常的秩序,內(nèi)皮細胞間隙增寬,單核巨噬細胞的浸潤,泡沫細胞的形成,平滑肌細胞的變形,增生;在超微結(jié)構(gòu)層面則表現(xiàn)為內(nèi)皮細胞的損傷,結(jié)構(gòu)異常,胞膜失去光滑平整的狀態(tài),細胞內(nèi)線粒體腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少,細胞胞質(zhì)顯清稀,內(nèi)皮細胞間隙擴大,可見單核巨噬細胞浸潤等異常表現(xiàn);通過中藥小劑量干預(yù)后,大鼠血管病變的程度可見明顯變輕,且隨著溫腎方劑量的提高,亞臨床甲減大鼠血管病變的情形明顯減輕,而且較之西藥治療組而言,還能夠體

9、現(xiàn)出其對于糾正亞臨床甲減大鼠血管病變的優(yōu)勢。
　　 結(jié)論:采取“甲狀腺全切+每日皮下注射L-T4”這種造模方法可以成功制備SCH模型大鼠。運用這種方法制備的SCH模型大鼠,外周組織處于低T3的組織甲減狀態(tài),而肝組織中的HMG-CoA還原酶的含量偏高,由于肝臟高HMG-CoA還原酶水平以及組織低T3狀態(tài)導(dǎo)致SCH模型大鼠的高TC,LDL-C尤其是高OX-LDL水平的血脂紊亂狀態(tài),從而發(fā)生對于血管內(nèi)皮的脂毒性作用,即對于血管內(nèi)皮細胞

10、的直接損傷;而這種損傷引起的ET-1,MCP-1等又反過來加重血管病變,形成較為嚴重的血管病變;通過溫腎方干預(yù)SCH大鼠后,發(fā)現(xiàn)溫腎方確實能夠改善實驗大鼠的SCH狀態(tài),提高外周組織T3的利用率,調(diào)整血脂紊亂狀態(tài),尤其是降低OX-LDL的水平,從而緩解對于血管內(nèi)皮的直接損傷以及由之引起的繼發(fā)性血管病變,這種療效是明顯的,而且相較于西藥組在改善血管內(nèi)皮損傷,減輕血管病變方面,中藥組尤其是中藥大劑量組效果更加突出。這就為在臨床上推廣運用溫腎方