豬GBP1、GBP2基因的分子特征與功能初步研究.pdf

1、疾病的預(yù)防與控制是現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)的關(guān)鍵問題,因而發(fā)掘疾病抵抗候選基因并應(yīng)用于抗病育種的實(shí)踐越來越重要。前期通過感染沙門氏菌豬肺臟的轉(zhuǎn)錄組研究我們篩選出許多差異表達(dá)基因,其中包括干擾素誘導(dǎo)的鳥苷酸結(jié)合蛋白(interferoninducible guanylate bindins proteins,GBPs)家族的GBP1和GBP2。研究表明,GBPs類似于Mx蛋白(myxovirus)都屬于干擾素誘導(dǎo)的GTP酶大家族,他們對(duì)生物體抵抗細(xì)胞

2、內(nèi)病原微生物感染起著重要作用。因此,我們以豬的GBP1和GBP2基原因研究對(duì)象進(jìn)行了基因克隆,染色體定位,亞細(xì)胞定位,與免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析和感染實(shí)驗(yàn)等相關(guān)研究。主要的研究結(jié)果如下:
　　 1.克隆了豬GBP1和GBP2基因3003bp和2237bp長(zhǎng)的cDNA序列并分析了基因組結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)兩個(gè)基因都包含11個(gè)外顯子。推導(dǎo)的氨基酸序列分析顯示這兩個(gè)基因都包含經(jīng)典的GTP結(jié)合基序,并且C末端具有蛋白質(zhì)異戊二烯化修飾的CAAX基序。

3、r>　　 2.利用體細(xì)胞和輻射雜種板將GBP1和GBP2分別定位于SSC4q21-q23和SSC4q24,都和SWR153標(biāo)記緊密連鎖。
　　 3.RT-PCR方法分析組織表達(dá)發(fā)現(xiàn)GBP1和GBP2基因都在成年通城豬的脾臟具有很高的表達(dá)水平,轉(zhuǎn)染融合表達(dá)質(zhì)粒的亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示GBP1和GBP2均在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。GBP1和GBP2基因在RNA水平上有著十分相似的表達(dá)模式。Poly(I:C)刺激PK15細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)顯示兩個(gè)基因在刺

4、激6小時(shí)后開始上調(diào),6小時(shí)到12小時(shí)表達(dá)量迅速增加,在約24小時(shí)后達(dá)到表達(dá)的頂峰,隨后在24到48小時(shí)開始回落?？寺×藘蓚€(gè)基因5’調(diào)控區(qū)的序列,轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測(cè)結(jié)果表明ISRE和GAS順式作用元件可能在調(diào)控GBP1和GBP2基因表達(dá)中起關(guān)鍵作用。
　　 4.在兩個(gè)基因中分別發(fā)現(xiàn)T4個(gè)和3個(gè)SNP位點(diǎn),并對(duì)其中兩個(gè)改變氨基酸的SNP位點(diǎn)進(jìn)行了免疫性狀的關(guān)聯(lián)分析,中外豬種的基因型頻率分析。關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示GBP1的Eco81I多態(tài)位點(diǎn)和