優(yōu)化MARCM條件實(shí)現(xiàn)水平運(yùn)動(dòng)視覺神經(jīng)元的單細(xì)胞標(biāo)記.pdf

1、MARCM是一項(xiàng)基于遺傳學(xué)的單細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，在1999年由Tzumin Lee和Liqun Luo發(fā)明。它通過FLP/FRT介導(dǎo)的基因重組，實(shí)現(xiàn)了純合突變細(xì)胞的正向標(biāo)記。MARCM發(fā)展至今，已經(jīng)被應(yīng)用在很多領(lǐng)域：神經(jīng)元的單細(xì)胞標(biāo)記；單個(gè)細(xì)胞的譜系分析；在健康個(gè)體上實(shí)現(xiàn)純合突變來研究基因的功能。MARCM把基因操作和神經(jīng)研究提高到了單細(xì)胞水平，推動(dòng)了神經(jīng)科學(xué)的快速發(fā)展。在技術(shù)上，早期的MARCM只用于單色標(biāo)記，現(xiàn)在在MARCM的基礎(chǔ)上發(fā)展

2、的嵌合體技術(shù)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了雙色和多色標(biāo)記。
　　果蠅中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有一種細(xì)胞稱為神經(jīng)母細(xì)胞，神經(jīng)母細(xì)胞不對(duì)稱分裂會(huì)產(chǎn)生一個(gè)新的神經(jīng)母細(xì)胞和一個(gè)神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞。在神經(jīng)母細(xì)胞發(fā)育進(jìn)入有絲分裂時(shí)熱激活FLP，可以得到一個(gè)綠色熒光標(biāo)記的神經(jīng)母細(xì)胞或者神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞。當(dāng)不被標(biāo)記的神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞處于有絲分裂時(shí)，激活FLP重組酶，則其產(chǎn)生的兩個(gè)神經(jīng)元中，有一個(gè)神經(jīng)元被綠色熒光標(biāo)記，所以會(huì)得到一個(gè)被標(biāo)記的單細(xì)胞克隆。細(xì)胞的發(fā)育時(shí)間是得到單細(xì)胞克隆的重要條件

3、。本文把處女果蠅與雄性果蠅放入果蠅管內(nèi)進(jìn)行交配，當(dāng)雌性果蠅開始產(chǎn)卵的時(shí)候，每隔2個(gè)小時(shí)把果蠅轉(zhuǎn)移到新果蠅管中。在果蠅卵發(fā)育50-70小時(shí)內(nèi)，每隔兩個(gè)小時(shí)熱激活FLP。在不同時(shí)間段內(nèi)激活FLP時(shí)，統(tǒng)計(jì)MARCM對(duì)LPTCs神經(jīng)元單細(xì)胞標(biāo)記的效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明當(dāng)果蠅卵發(fā)育60-62小時(shí)熱激活FLP，MARCM對(duì)VS神經(jīng)元進(jìn)行單細(xì)胞標(biāo)記的效率最高。當(dāng)果蠅卵發(fā)育52-56小時(shí)熱激活FLP，MARCM對(duì)HS神經(jīng)元進(jìn)行單細(xì)胞標(biāo)記的效率最高。