寧波-舟山港致病菌毒力相關(guān)基因挖掘及耐藥分析.pdf

1、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是一種廣泛存在于海水近岸、貝類和魚類等海洋生物中的革蘭氏陰性嗜鹽菌，也是引起食源性疾病最常見(jiàn)的致病菌之一。由副溶血弧菌引起的食物中毒，尤其在我國(guó)的沿海地區(qū)，副溶血弧菌引起的在食源性細(xì)菌中的比例一直占有較高比例，其主要是由于食用了加工不當(dāng)而導(dǎo)致的污染了致病性副溶血弧菌的海產(chǎn)品而引起的食物中毒事件。致病性副溶血弧菌毒力基因是耐熱性溶血素(TDH)或其同源性溶血素TRH，分別被基因td

2、h和trh編碼。然而，從環(huán)境、海產(chǎn)品和臨床中分離得到的致病性副溶血弧菌并不是所有的致病菌都包含有該基因。研究顯示，幾乎所有的臨床株都可產(chǎn)生神奈川現(xiàn)象（含TDH基因的副溶血弧菌可在我妻氏血平板上產(chǎn)生一種特殊的溶血現(xiàn)象），此現(xiàn)象和TDH有密切相關(guān)。而環(huán)境中的菌株很少有神奈川現(xiàn)象，但若其含有tdh或trh則被認(rèn)為是致病菌。副溶血弧菌對(duì)宿主的致病性與副溶血弧菌產(chǎn)生的各種毒力因子息息相關(guān)，對(duì)這些毒力因子及相關(guān)基因的研究已廣泛引起研究者足夠的興趣。

3、其中包括tdh、gyrB、tlh和toxR等基因。
　　 溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)是廣泛分布于河口和海洋的革蘭氏陰性菌，是海洋動(dòng)物和人共染的一種致病菌。致病性的溶藻弧菌是危害大黃魚最嚴(yán)重的病原菌。大黃魚是中國(guó)海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚類中最為重要的，從而對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。溶藻弧菌會(huì)引起敗血癥、炎癥反應(yīng)、傷口感染等癥狀，同時(shí)也是腹瀉病原菌中的一員，流行范圍廣，發(fā)病率高。溶藻弧菌產(chǎn)生的各種毒力因子，目前研究的有膠

4、原蛋白酶基因、鐵攝取調(diào)節(jié)基因、堿性絲氨酸蛋白酶基因和鞭毛絲蛋白基因，毒力基因的調(diào)控基因以及調(diào)控的目的基因。
　　 氣單胞菌屬是常見(jiàn)的致病菌，在自然界中分布廣泛。由嗜水氣單胞菌引起的疾病種類繁多，其中包括出血癥、腹水病等。這些疾病給水產(chǎn)養(yǎng)殖帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，并且還能通過(guò)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物和海產(chǎn)品感染人類。
　　 抗生素一直被認(rèn)為是治療由致病菌引起的此類疾病的良藥，但隨著抗生素的大量使用，該致病菌的耐藥株不斷出現(xiàn)，由此給人類帶

5、來(lái)了較大的困擾。因此，研究副溶血弧菌、溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌的耐藥性、致病性、表型和毒力基因之間的相互關(guān)系，明晰其致病機(jī)理，繼而獲得有效抑制其致病力的方法具有重大意義。
　　 本研究主要從致病性副溶血弧菌、溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌的毒力相關(guān)基因著手，通過(guò)PCR技術(shù)對(duì)已報(bào)道的毒力及相關(guān)基因進(jìn)行檢瀏、測(cè)序和克隆保藏。結(jié)果從副溶血弧菌中擴(kuò)增到毒力相關(guān)基因gyrB、tlh和toxR，從溶藻弧菌中擴(kuò)增分離到毒力相關(guān)的膠原蛋白酶基因、堿性絲氨

6、酸蛋白酶基因、鞭毛絲蛋白基因和鐵攝取調(diào)節(jié)基因，從嗜水氣單胞菌中分離到氣溶素基因和腸毒素基因。最后，對(duì)致病性副溶血弧菌、溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌的常見(jiàn)耐藥性進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明:副溶血弧菌對(duì)萬(wàn)古霉素具有耐藥性，對(duì)11種抗生素高度敏感;溶藻弧菌對(duì)青霉素、萬(wàn)古霉素高度耐藥，對(duì)9種抗生素高度敏感。嗜水氣單胞菌具有多重耐藥性，對(duì)利福平、新生霉素、大環(huán)內(nèi)酯類（2種）抗生素、新霉素、頭孢噻呋、四環(huán)素7種抗生素高度耐藥，其對(duì)7種抗生素高度敏感。通過(guò)分析了