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1、目的:
通過(guò)建立大鼠體外循環(huán)模型,探討單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂對(duì)體外循環(huán)腦損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
方法:
成年雄性SD大鼠24只,體重350~450g,隨機(jī)分成假手術(shù)對(duì)照組(Sham組)、體外循環(huán)組(CPB組)、體外循環(huán)+單唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂處理組(GM1組),每組8只。Sham組未建立體外循環(huán)模型;CPB組預(yù)充液中加入0.9%生理鹽水1ml/kg;GM1組在預(yù)充液中加入GM120mg/kg。CPB組
2、和GM1組進(jìn)行CPB60min,于CPB結(jié)束即刻(T2)、結(jié)束后3h(T4)采集血標(biāo)本,用ELISA法檢測(cè)大鼠血漿腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。CPB結(jié)束后3h時(shí)斷頭取腦組織標(biāo)本,透射電鏡觀察大腦皮層超微結(jié)構(gòu)變化;TUNEL法標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞凋亡;免疫組化法檢測(cè)NF-κB蛋白的表達(dá);Western-blot法檢測(cè)皮質(zhì)區(qū)NF-κB蛋白的活性。
結(jié)果:
CPB組和GM1組轉(zhuǎn)流中平均動(dòng)脈壓、心率、PaO2、PaC
3、O2、紅細(xì)胞比積差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
與Sham組比較,在透視電鏡下CPB組大腦皮層細(xì)胞核膜模糊,核仁消失,核內(nèi)異染色質(zhì)凝聚、邊集,細(xì)胞器有減少或出現(xiàn)空泡化,細(xì)胞間緊密連接相對(duì)松散。GM1組超微結(jié)構(gòu)的改變較之明顯減輕。
免疫組化結(jié)果顯示,CPB可使大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡增多。與Sham組比較,CPB組和GM1組中的神經(jīng)細(xì)胞凋亡均增多,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與CPB組比較,GM1組凋亡
4、的神經(jīng)細(xì)胞均減少,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
與Sham組比較,CPB和GM1組T2、T4時(shí)點(diǎn)血漿TNF-α水平均升高(P<0.05)。與CPB組比較,GM1組T2、T4時(shí)點(diǎn)血漿TNF-α水平均降低,且T2、T4時(shí)點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
免疫組化和Western-blot結(jié)果表明,CPB可使大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞的NF-κB蛋白表達(dá)增高。與Sham組比較,CPB組和GM1組NF-κB蛋白表達(dá)
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