副神經(jīng)移位膈神經(jīng)重建高位頸髓損傷大鼠呼吸功能的中樞機制的研究.pdf

1、目的：高位頸髓損傷患者，呼吸功能喪失，死亡率極高，為了降低此類患者的死亡率，重建其自主呼吸功能尤為重要。本課題組在國家自然基金的資助下，采用副神經(jīng)移位膈神經(jīng)的方法成功重建了高位頸髓損傷大鼠的呼吸功能，建立了動物模型。本研究旨在通過腺相關病毒、偽狂犬病毒逆行示蹤及免疫組織化學染色的方法進一步揭示副神經(jīng)移位膈神經(jīng)重建高位頸髓損傷大鼠呼吸功能的中樞機制，為進一步將該方法學運用于臨床提供更為殷實的理論依據(jù)。
　　方法：本實驗以成年雄性SD

2、大鼠為實驗動物。利用腺相關病毒AAV-Retro-GFP注射副神經(jīng)、膈神經(jīng)，進行跨單突觸逆行追蹤支配正常SD大鼠副神經(jīng)和膈神經(jīng)的運動神經(jīng)元。利用偽狂犬病毒PRV-CMV-EGFP注射副神經(jīng)、膈神經(jīng)，進行跨多級突觸逆行追蹤支配正常SD大鼠副神經(jīng)和膈神經(jīng)的前運動神經(jīng)元及其相關神經(jīng)核團。利用免疫組織化學染色的方法，對病毒標記核團進行特異性雙標，進一步確證病毒標記的神經(jīng)核團。相同方法，利用腺相關病毒AAV-Retro-GFP、偽狂犬病毒PRV-

3、CMV-EGFP注射吻合神經(jīng)吻合處遠端，進行逆行追蹤副神經(jīng)移位膈神經(jīng)6個月后支配SD大鼠膈肌運動的運動神經(jīng)元、前運動神經(jīng)元及其相關神經(jīng)核團。并利用特異性抗體對病毒標記核團進行雙標，進一步確證病毒標記神經(jīng)核團。最后，通過對比支配正常SD大鼠的膈神經(jīng)、副神經(jīng)及神經(jīng)移位后SD大鼠的吻合神經(jīng)的運動神經(jīng)元、前運動神經(jīng)元及其相關神經(jīng)核團的變化，初步揭示神經(jīng)移位重建高位頸髓損傷SD大鼠呼吸功能的中樞機制變化。
　　結果：(1)正常SD大鼠:支配

4、副神經(jīng)斜方肌支的運動神經(jīng)元主要集中在延髓網(wǎng)狀核。支配副神經(jīng)的前運動神經(jīng)元主要集中在孤束核、延髓中縫、面神經(jīng)核。支配膈神經(jīng)的運動神經(jīng)元主要集中在頸髓C4-C6的脊髓前角。支配膈神經(jīng)的前運動神經(jīng)元主要集中在腹側呼吸群、延髓孤束核、延髓中縫、上橄欖核。(2)神經(jīng)移位后SD大鼠:支配吻合神經(jīng)的運動神經(jīng)元主要集中在延髓網(wǎng)狀核。支配吻合神經(jīng)的前運動神經(jīng)元主要集中在孤束核、延髓中縫、面神經(jīng)核。
　　結論：神經(jīng)移位6個月后，SD大鼠的副神經(jīng)核和（