PFOS通過(guò)抑制3β-HSD1活性導(dǎo)致人胎盤(pán)細(xì)胞JEG-3孕酮分泌減少的研究.pdf

1、目的:羥基脫氫酶（Hydroxysteroid dehydrogenases，HSDs）是一類(lèi)類(lèi)固醇激素合成酶，參與類(lèi)固醇的生物合成和代謝。許多環(huán)境污染物能夠直接抑制一種或多種HSDs，從而干擾內(nèi)源性類(lèi)固醇激素水平。本文旨在比較4種不同的全氟烷烴類(lèi)化合物包括全氟辛基磺酸(PFOS)、全氟辛酸(PFOA)、全氟己基磺酸(PFHxS)和全氟丁基磺酸(PFBS)對(duì)人胎盤(pán)3β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶1(3β-HSD1)和人絨毛膜癌細(xì)胞JEG-33β-

2、HSD1活性的抑制作用。
　　方法:(1)在pcDNA3.1上構(gòu)建一個(gè)能夠表達(dá)人3β-HSD1 cDNA的質(zhì)粒。篩選出成功插入人3β-HSD1 cDNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至哺乳動(dòng)物COS1細(xì)胞中。用之前培養(yǎng)的能夠表達(dá)人3β-HSD1的哺乳動(dòng)物COS1細(xì)胞制備微粒體，測(cè)定蛋白濃度，然后將蛋白濃度調(diào)整至2mg/ml備用。3β-HSD1活性檢測(cè)體系:0.2μM孕烯醇酮和0.2mM NAD+溶于250μl含0.5％吐溫-20 PBS的溶液。計(jì)算3

3、β-HSD1活性的線性范圍。用100μM的PFASs和20μg線粒體蛋白確定最大抑制濃度。之后檢測(cè)上述條件下線性范圍內(nèi)3β-HSD1的反應(yīng)速率用不同濃度的PFOS測(cè)定其IC50值。通過(guò)雙倒數(shù)作圖，用不同濃度的PFOS和孕烯醇酮(0.002～10μM)確定PFOS對(duì)孕烯醇酮的抑制模式，用不同濃度的PFOS和NAD+(0.002～10μM)確定PFOS對(duì)NAD+的抑制模式。JEG-3細(xì)胞培養(yǎng)于含有100μMPFASs的MEM培養(yǎng)基中。培養(yǎng)1

4、2h后，JEG-3細(xì)胞用于細(xì)胞毒性分析，培養(yǎng)液用于孕酮水平檢測(cè)。培養(yǎng)液中孕酮濃度由放射性免疫法測(cè)定。
　　結(jié)果:3β-HSD1活性測(cè)定結(jié)果得出PFOS能夠抑制人3β-HSD1活性，其半數(shù)抑制濃度為3.27±0.07μM，而PFOA、PFHx和PFBS在濃度高達(dá)100μM時(shí)并不能抑制人3β-HSD1活性。在JEG-3細(xì)胞系中，只有PFOS明顯抑制JEG-3細(xì)胞分泌孕酮，并且該抑制作用呈劑量依賴(lài)性在孕烯醇酮產(chǎn)生過(guò)程中，PFOS競(jìng)爭(zhēng)性抑

5、制3β-HSD1活性，是NAD+的混合型抑制劑。
　　結(jié)論:本研究表明，PFOS是PFASs中唯一的能夠有效抑制3β-HSD1酶活性的抑制劑，PFASs對(duì)3β-HSD1活性的抑制與PFASs本身的碳鏈長(zhǎng)度有關(guān)，PFASs對(duì)人3β-HSD1活性抑制強(qiáng)度:PFOS＞PFOA=PFHxS=PFBS。在人絨癌細(xì)胞JEG-3中，PFOS明顯抑制3β-HSD1的活性，導(dǎo)致JEG-3細(xì)胞孕酮分泌減少，IC50為3.27μM，當(dāng)PFOS濃度為1μ