幾種常見致病菌的活的非可培養(yǎng)狀態(tài)研究.pdf

1、活的非可培養(yǎng)(Viable but nonculturable，VBNC)狀態(tài)作為微生物學的一個全新概念，近二十多年受到了微生物界的極大關注。但是對于VBNC狀態(tài)致病菌的復蘇情況、致病機制等方面的研究報道很少。本文對遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)CW7、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)VIB799、FYZ8621.4、溶藻膠弧菌(Vibrio alginolyticus)VIB283、

2、鰻弧菌(Vibrio anguillarum)CW1、CW4幾種常見致病菌活的非可培養(yǎng)狀態(tài)的進入、復蘇及進入VBNC狀態(tài)后的形態(tài)變化、毒力情況進行了研究。 用吖啶橙染色熒光顯微鏡直接計數法(AODC)、活菌直接計數法(DVC)和涂布平板法(PC)研究這幾種致病菌能否進入VBNC狀態(tài)。研究發(fā)現，在低溫(4℃)寡營養(yǎng)條件下，這幾種致病菌進入VBNC狀態(tài)的時間分別為：遲緩愛德華氏菌CW7 28 d；副溶血弧菌VIB799和FYZ862

3、1.4分別為30 d和88 d；溶藻膠弧菌VIB283為90 d；鰻弧菌CW1和CW4分別為324 d和266 d。在實驗期間，這幾種致病菌的存活曲線發(fā)生了相似的變化，當實驗菌株進入VBNC狀態(tài)時，它們的總菌數與剛接種的濃度相比幾乎沒有太大變化，活菌數比總菌數低兩到三個數量級，并且穩(wěn)定在這一較低的水平，可培養(yǎng)細菌數為零。 用熒光顯微鏡、掃描電鏡及流式細胞儀對這幾種致病菌的正常狀態(tài)、VBNC狀態(tài)及復蘇狀態(tài)進行的研究表明，進入VBN

4、C狀態(tài)后，這幾種菌在形態(tài)上發(fā)生了一致的變化，即都由原來的桿狀、短桿狀或弧狀變?yōu)榍驙?，并且體積比正常狀態(tài)的細胞明顯縮??；流式細胞儀研究還發(fā)現，復蘇狀態(tài)的副溶血弧菌VIB799及溶藻膠弧菌VIB283在形態(tài)上分別與其正常狀態(tài)幾乎沒有差異，復蘇狀態(tài)的遲緩愛德華氏菌CW7略小于正常狀態(tài)的遲緩愛德華氏菌CW7。 對遲緩愛德華氏菌CW7、副溶血弧菌VIB799、溶藻膠弧菌VIB283分別用升溫復蘇法、添加營養(yǎng)物質升溫復蘇法及雞胚復蘇法進行了

5、復蘇，研究發(fā)現采用添加營養(yǎng)物質升溫復蘇法及雞胚復蘇法對遲緩愛德華氏菌CW7實現了復蘇，其復蘇時間分別是8 d和6 d；采用添加營養(yǎng)物質升溫復蘇法對副溶血弧菌VIB799實現了復蘇，其復蘇時間為2 d；采用升溫復蘇法及添加營養(yǎng)物質升溫復蘇法對溶藻膠弧菌VIB283實現了復蘇，其復蘇時間為8 d和16 h。將VBNC狀態(tài)及復蘇狀態(tài)的遲緩愛德華氏菌CW7注射大菱鲆進行毒力測定發(fā)現，注射了VBNC狀態(tài)的遲緩愛德華氏菌CW7細胞的大菱鲆在實驗期間

6、未出現發(fā)病或死亡現象，在這些大菱鲆體內也沒有分離出遲緩愛德華氏菌CW7，而注射了復蘇狀態(tài)的遲緩愛德華氏菌CW7的大菱鲆在7 d時出現死亡現象。結果顯示，VBNC狀態(tài)的遲緩愛德華氏菌可能保持了它的致病潛能，伴隨著復蘇的實現，它的致病力也得以恢復。 對正常狀態(tài)的、升溫復蘇得到的及添加營養(yǎng)物質升溫復蘇得到的溶藻膠弧菌VIB283細胞借助于API 20E進行生理生化檢測發(fā)現，與正常細胞及升溫復蘇得到的細胞相比，通過添加營養(yǎng)物質升溫復蘇得