IFT172對(duì)小鼠精子數(shù)目、活力以及生育能力的影響.pdf

1、目的:研究鞭毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白172（Intraflagellartransportprotein172，IFT172）在小鼠生精細(xì)胞中的功能以及精子鞭毛形成過(guò)程和生育能力中的作用。
　　方法:1、將成年的Ift172flox/flox雌性小鼠與Stra8-iCre雄性小鼠雜交，建立的Ift172生精細(xì)胞條件敲除小鼠為實(shí)驗(yàn)組小鼠，以野生型小鼠為對(duì)照。2、用10對(duì)六周以上的Ift172條件敲除雄鼠或野生型雄鼠分別與成年的野生型雌鼠交配兩個(gè)

2、月以上，評(píng)估其生育力及繁殖能力。3、收集附睪精子，精子計(jì)數(shù)，檢測(cè)精子活力，光鏡下觀察精子形態(tài)。4、收集小鼠睪丸和附睪進(jìn)行HE染色，觀察精子發(fā)生過(guò)程的各個(gè)階段。5、透射電鏡(TEM)觀察兩組小鼠精子的超微結(jié)構(gòu)。6、蛋白印跡(WesternBlot)檢測(cè)IFT25、IFT27、IFT81、AKAP4、ODF2、SPAG16L等相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。7、分離小鼠睪丸生精細(xì)胞，免疫熒光染色染色檢測(cè)IFT172的定位以及Ift172條件敲除小鼠體內(nèi)

3、IFT172敲除水平，并觀察精子中纖維鞘蛋白AKAP4和外周致密纖維蛋白ODF2的定位。
　　結(jié)果:Ift172floJflox;Stra8-iCre條件敲除小鼠都能夠生長(zhǎng)至成年。1、與正常的小鼠相比較，Ift172flox/flox;Stra8-iCre條件敲除小鼠的睪丸重量/體重比例沒(méi)有明顯差別。其中有六成的成年雄性純合子小鼠是不育的。2、組織學(xué)檢測(cè)顯示，與野生型小鼠相比，Ift172flox/flox;Stra8-iCre條

4、件敲除小鼠的精子形成階段發(fā)生異常。3、Ift172被敲除后，小鼠附睪中僅殘存少量發(fā)育完全的精子，大部分精子出現(xiàn)精子尾卷曲。且精子數(shù)目比野生型小鼠減少了10倍左右，精子活力較野生型小鼠有明顯降低。4、與野生型小鼠相比，在Ift172條件敲除小鼠的睪丸內(nèi)，其他的幾種IFT家族B復(fù)合物的成員IFT20、IFT25、IFT27和IFT81以及IFT家族A復(fù)合物中的IFT140的表達(dá)水平?jīng)]有明顯的變化。此外，軸絲蛋白SPAG16L的表達(dá)量也沒(méi)有明

5、顯變化。但是外周致密纖維結(jié)構(gòu)蛋白ODF2以及線粒體鞘蛋白AKAP4的表達(dá)量顯著下降。5、免疫熒光染色結(jié)果顯示，在野生型小鼠中IFT172定位在生精細(xì)胞中定位在長(zhǎng)形精子細(xì)胞的精子領(lǐng)處，而AKAP4和ODF2在Ift172條件敲除小鼠精子中的定位與野生型小鼠相比沒(méi)有明顯改變。
　　結(jié)論:IFT172在生精細(xì)胞中表達(dá)量減少導(dǎo)致小鼠精子數(shù)目、活力以及生育能力下降，IFT172是一個(gè)對(duì)于雄性小鼠的生育能力以及精子發(fā)生所必需的蛋白，它很可能參