慢性乙型肝炎肝臟炎癥和纖維化中CaM、Bad蛋白變化影響的研究.pdf

1、背景:
　　 凋亡(apoptosis)是個別細(xì)胞程序性細(xì)胞死亡的表現(xiàn)形式，是由體內(nèi)外因素出發(fā)細(xì)胞內(nèi)預(yù)存的死亡程序而導(dǎo)致的細(xì)胞主動性死亡方式。凋亡在生物胚胎發(fā)生發(fā)育、成熟細(xì)胞新舊交替、激素依賴性生理退化、萎縮和老化以及化學(xué)誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡都發(fā)揮著不可替代的重要作用。
　　 乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是我國重大的公共衛(wèi)生問題，盡管我國長期以來在肝炎防治中取得顯著成效，但HBV慢性感染仍是危害最嚴(yán)重的傳染病之一，肝細(xì)胞凋亡

2、在慢性乙型肝炎患者病情進展中起著舉足輕重的地位，碎片狀壞死是慢性乙型肝炎早期特征性病理改變，毛玻璃樣變是肝炎、肝纖維化及肝硬化的必然進程，目前已證實，該病理改變實質(zhì)即為凋亡。經(jīng)典的凋亡途徑包括兩種，即內(nèi)源性途徑（intrinsicpathway，又稱線粒體凋亡途徑）和外源性途徑（extrinsicpathway，又稱死亡受體凋亡途徑）。近年來研究證明，除線粒體以外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(endoplasmicreticulum，ER)等細(xì)胞器也成為細(xì)

3、胞凋亡信號整合的主要位點。研究發(fā)現(xiàn)，ER可能是細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)凋亡的一個場所，因此，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulumstress，ERS)反應(yīng)性凋亡途徑作為一種新的凋亡途徑，成為凋亡研究的熱點之一。
　　 慢性乙型肝炎病理分級（grading，G）與分期（staging，S）是臨床上評估肝臟炎癥活動程度和纖維增生程度的指標(biāo)，其中乙型肝炎病毒是誘發(fā)肝臟炎癥和纖維化的始動因素，肝細(xì)胞轉(zhuǎn)歸主要通過細(xì)胞壞死和凋亡，其中不同

4、炎癥程度誘發(fā)細(xì)胞凋亡是肝細(xì)胞受到影響的重要因素，然而在不同程度下肝臟炎癥和纖維化之間的變化關(guān)系對細(xì)胞凋亡影響如何，目前見到報道較少，本文著重采用免疫組織化學(xué)SP法觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑中兩種關(guān)鍵的細(xì)胞凋亡因子:鈣調(diào)蛋白(calmodulin，CaM)和Bad蛋白在慢性乙型肝炎患者不同病理分級和分期的表達情況，通過肝臟炎癥分級和纖維化分期影響兩種凋亡因子，以期更深一步地了解肝臟病理進展中肝細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)變化，分析內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑在慢性乙型肝

5、炎中的地位和意義，為慢性乙型肝炎的治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 目的:
　　 觀察比較CaM和Bad在慢性乙型肝炎(ChronicHepatitisB，CHB)不同炎癥分級和纖維化分期中的表達情況，探討兩種因子在不同肝臟炎癥活動和纖維增生程度中的變化規(guī)律。
　　 方法:
　　 病例收集:收集2010年6月至2012年12月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染科確診為CHB并同期進行肝組織病理學(xué)檢查的病例，排除合并其他疾

6、病如其他病毒性肝炎、肝硬化失代償期、酒精性肝病、脂肪肝、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、肝癌;或合并嚴(yán)重的心、腦、肺、腎等臟器實質(zhì)性病變。
　　 實驗方法:根據(jù)病理科醫(yī)師診斷的不同分級分期，取肝臟活組織標(biāo)本制作蠟塊，進行蘇木素-伊紅HE染色，采用免疫組織化學(xué)SP法，檢測CaM和Bad蛋白在肝臟的表達水平，采集圖像后采用軟件分析系統(tǒng)計算平均灰度值。
　　 統(tǒng)計學(xué)分析:采用SPSS17.0與EXCEL2007統(tǒng)計軟件進行

7、數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((X)±s)表示。采用秩和檢驗比較不同病理分級分期凋亡因子表達的差異性，采用Spearman等級相關(guān)分析法判斷肝細(xì)胞凋亡因子與肝臟病理學(xué)分級之間的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:
　　 1.炎癥分級G0、G1、G2、G3、G4間的CaM表達水平分別為86.570±2.00，115.827±9.344，136.389±8.694，147.111±10.266，170.904±5.060，秩和檢驗提示

8、5組炎癥分級之間CaM表達水平的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4間的CaM表達水平分別為82.939±6.300,118.318±9.119,137.439±4.963,145.81±7.082,169.919±10.258，秩和口檢驗提示5組纖維化分期之間CaM表達水平的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.炎癥分級G0、G1、G2、G3、G4間的Bad表達水

9、平分別為72.849±2.287,105.780±2.672,121.206±5.423,137.649±5.953,166.435±3.900，秩和檢驗提示5組炎癥分級之間Bad表達水平的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4間的Bad表達水平分別為72.115±3.325，105.454±4.815，121.332±5.069，135.812±6.148，168.071±3.65

10、1，秩和檢驗提示5組纖維化分期之間Bad表達水平的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.CaM與炎癥分級、纖維化分期相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.332，0.361。
　　 6.Bad與炎癥分級、纖維化分期相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.429，0.432。
　　 7.炎癥分級、纖維化分期是CaM與Bad肝細(xì)胞表達水平的獨立危險因素。
　　 結(jié)論:
　　 不同肝臟病理分級CaM的表達水平不同，CaM與肝