靜脈鐵劑在慢性腎衰竭大鼠中氧化應(yīng)激反應(yīng)及其干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：慢性腎衰竭大鼠反復(fù)注射靜脈鐵劑致氧化應(yīng)激反應(yīng)的研究
　　 研究背景和目的：
　　 貧血是慢性腎臟病(chronic kidney disease，CKD)常見的臨床表現(xiàn)和并發(fā)癥，貧血增加CKD患者心血管疾病等并發(fā)癥導(dǎo)致患者死亡率升高。腎性貧血最主要的原因是絕對或相對的促紅細(xì)胞生成素缺乏，缺鐵、慢性失血、炎癥、紅細(xì)胞壽命縮短等一些因素也參與了貧血的發(fā)生。CKD患者貧血時(shí)缺鐵非常普遍，尤其是在紅細(xì)胞生成刺激劑(er

2、ythropoiesis-stimulating agents，ESA)治療期間更易發(fā)生。大量的研究已經(jīng)證實(shí)了靜脈鐵劑的療效和短期安全性，靜脈鐵劑已成為ESA治療腎性貧血時(shí)的重要輔助藥物。但是不少研究報(bào)導(dǎo)靜脈補(bǔ)鐵能加劇體內(nèi)的氧化應(yīng)激及微炎癥狀態(tài)，引起脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸分子以及組織損傷。氧化應(yīng)激產(chǎn)物如過氧化低密度脂蛋白(OxLDL)通過促進(jìn)泡沫細(xì)胞、脂紋形成以及損傷血管內(nèi)皮功能參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。目前，臨床上常用的靜脈鐵劑主要是

3、鐵的各種碳水化合物制劑，如低分子右旋糖酐鐵(low weight iron dextran)、蔗糖鐵(iron sucrose)以及葡萄糖酸亞鐵(iron gluconate)，前兩種鐵劑在我國已經(jīng)上市。急性實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)靜脈鐵劑可以使機(jī)體氧化應(yīng)激產(chǎn)物如MDA水平-過性顯著升高，多數(shù)在短時(shí)間內(nèi)(24h左右)恢復(fù)，并且不同鐵劑引起的氧化應(yīng)激存在明顯差異。關(guān)于不同靜脈鐵劑重復(fù)多次給藥后對慢性腎衰竭(chronic renal failure，

4、CRF)機(jī)體氧化應(yīng)激的影響目前報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)以5/6腎大部切除大鼠為模型，觀察兩種常用靜脈鐵劑小劑量低分子右旋糖酐鐵和蔗糖鐵10次靜脈補(bǔ)鐵后CRF大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)的變化，為進(jìn)一步了解鐵劑治療腎性貧血時(shí)的氧化應(yīng)激及其干預(yù)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 選用6周齡體重200-230g雄性SD大鼠，二步法5/6腎大部切除術(shù)建立慢性腎衰竭大鼠模型。大鼠右腎切除術(shù)后第4周，將符合條件的慢腎衰大鼠隨機(jī)分為3組：低分子

5、右旋糖酐鐵組(10mg/kg+生理鹽水稀釋至0.4ml，每周周一、周四尾靜脈注射兩次，共5周，n=6)、蔗糖鐵組(10mg/kg+生理鹽水稀釋至0.4ml，每周周一、周四尾靜脈注射兩次，共5周，n=6)、CRF對照組(給予同等體積的生理鹽水尾靜脈注，n=6)，同時(shí)以假手術(shù)組為正常對照組(Sham組，n=6)。觀察6周，比較各組大鼠腎功能、尿蛋白、血常規(guī)、鐵代謝指標(biāo)、血和組織氧化應(yīng)激指標(biāo)以及組織病理變化等差異。
　　 結(jié)果：

6、>　　 1.CRF對照組、低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組3組大鼠腎臟切除比例、基線血清肌酐和尿素氮、尾動(dòng)脈收縮壓、尿蛋白/肌酐比值、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積及體重?zé)o顯著差異(P>0.05)；蔗糖鐵組大鼠從注射鐵劑第3周開始體重顯著低于CRF對照組(P<0.05)和低分子右旋糖酐鐵組(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)，3組CRF大鼠的尾動(dòng)脈收縮壓、血清肌酐和尿素氮、尿蛋白/肌酐比值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組每只大鼠平

7、均補(bǔ)鐵劑量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 2.靜脈鐵劑組大鼠血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積明顯高于CRF對照組(P<0.05)，低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組之間無顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.CRY對照組大鼠的血清鐵、血清鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白顯著低于Sham組(P<0.05)；靜脈補(bǔ)鐵后，CRF大鼠鐵狀態(tài)指標(biāo)較CRF對照組顯著改善，低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組大鼠血清鐵、血清總鐵結(jié)合力、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度、血清鐵蛋白以及轉(zhuǎn)

8、鐵蛋白水平顯著高于CRF對照組(P<0.01)，蔗糖鐵組和低分子右旋糖酐鐵組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 4.3組CRF大鼠的血清SOD、CAT及TAOC水平均較Sham升高(P<0.05)，低分子右旋糖酐鐵組、蔗糖鐵組和CRF對照組三組之間大鼠血清SOD及TAOC水平無顯著性差異(P>0.05)；鐵劑治療組血清CAT水平高于CRF對照組(P<0.05)；CRF大鼠血漿GSH-Px水平較Sham組大鼠顯著降低(P<0

9、.05)，蔗糖鐵組顯著低于低分子右旋糖酐鐵組和CRF對照組(P<0.01)，低分子右旋糖酐鐵組與CRF對照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.519)。
　　 5.CRY對照組血漿AOPP明顯高于Sham組(81.83±19.93 vs40.12±14.98μmol/L，P<0.01)，低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組顯著高于CRF對照組(127.84±21.19 vs134.21±29.38 vs81.83±19.93μmol/L，P<0

10、.05)，低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(127.84±21.19 vs134.21±29.38μmol/L，P>0.05)。
　　 6.3組CRF大鼠血漿MDA均顯著高于Sham組(P<0.01)，低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組血漿MDA水平高于CRF對照組，蔗糖鐵組血漿MDA水平高于低分子右旋糖酐鐵組(蔗糖鐵組vs低分子右旋糖酐鐵組vs CRF對照組vsSham組，6.06±0.73 vs4.99±0.80 v

11、s2.53±0.18 vs1.19±0.38 nmol/L，P<0.05)。
　　 7.CRF對照組、低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組3組大鼠腎臟病理改變相似，腎小球硬化指數(shù)和小管間質(zhì)纖維化評分的比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 8.兩組靜脈鐵劑大鼠腎皮質(zhì)、肝組織MDA水平顯著高于Sham組和CRF對照組(P<0.05)，低分子右旋糖酐鐵組、蔗糖鐵組之間以及Sham組和CRF對照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；蔗

12、糖鐵組大鼠左室心肌組織MDA水平較Sham組顯著升高(P<0.05)；3組CRF大鼠腎臟皮質(zhì)組織、肝組織總SOD活性均低于Sham組(P<0.01)，3組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；CRF對照組大鼠腎皮質(zhì)的GSH-Px活性顯著高于Sham組、低分子右旋糖酐鐵組和蔗糖鐵組(P<0.05)，蔗糖鐵組GSH-Px活性也顯著高于低分子右旋糖酐鐵組(P<0.05)。蔗糖鐵組大鼠肝臟組織的GSH-Px活性顯著低于CRF對照組和低分子右旋糖酐鐵

13、組(P<0.05)，低分子右旋糖酐鐵組和CRF對照組無顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.5/6腎大部切除的CRF模型大鼠在右腎切除后4-10周內(nèi)，出現(xiàn)顯著的腎功能損害、貧血、血壓升高等改變，并且腎功能損害、尿蛋白排泄等相對保持穩(wěn)定，與既往研究一致；
　　 2.5/6腎大部切除的CRF大鼠存在缺鐵性貧血，單純靜脈補(bǔ)充鐵劑可以部分糾正貧血狀態(tài)，改善鐵代謝指標(biāo)；
　　 3.兩種靜脈鐵劑反復(fù)注

14、射后可以引起CRF大鼠的血MDA、AOPP顯著升高、GSH-Px降低等氧化應(yīng)激異常，血SOD、CAT及TAOC的升高可能是機(jī)體的代償產(chǎn)生；
　　 4.不同靜脈鐵劑致氧化應(yīng)激的能力存在一定差異，本部分實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蔗糖鐵對CRF大鼠的血MDA、GSH-PX以及腎組織MDA、肝組織GSH-Px等氧化應(yīng)激指標(biāo)的不利影響比低分子右旋糖酐鐵明顯；
　　 5.盡管存在氧化應(yīng)激改變，實(shí)驗(yàn)中鐵劑治療組的腎功能、尿蛋白排泄、腎臟病理等相關(guān)指標(biāo)無