上海地區(qū)奶牛四種病毒性疾病血清學(xué)調(diào)查和牛α、γ干擾素的原核表達(dá).pdf

1、近年來，我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)高速發(fā)展，飼養(yǎng)規(guī)模化、集約化程度不斷提高，牛傳染性疾病的防控形勢也越來越嚴(yán)峻?？谔阋?FMD)、牛病毒性腹瀉(BVD)、牛傳染性鼻氣管炎(IBR)、牛輪狀病毒(BRV)、牛冠狀病毒(BCV)等病毒性疾病在我國規(guī)模化牧場廣泛流行并造成重大損失，這些疾病已經(jīng)嚴(yán)重危害到我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。上海作為我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)源地，奶牛養(yǎng)殖全部實現(xiàn)規(guī)模化，重視并實現(xiàn)特定疫病的監(jiān)測和防控。針對目前奶牛病毒性疾病的流行情況，我們迫

2、切需要研制出高效經(jīng)濟的抗病毒和免疫增強性藥物。干擾素(Interferon，IFN)是動物細(xì)胞在受到誘生刺激后產(chǎn)生的一組具有抗病毒、參與免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性的細(xì)胞因子，分為三類，即Ⅰ、Ⅱ型和Ⅲ型干擾素。Ⅰ型干擾素具有強大的抗病毒活性，Ⅱ型干擾素可以調(diào)節(jié)機體免疫增強疾病抵抗力。目前人干擾素和豬干擾素已經(jīng)實現(xiàn)商品化生產(chǎn)并廣泛運用于臨床實踐，然而由于生產(chǎn)工藝和成本等問題，牛干擾素的研制還停留在實驗室階段，并未在臨床上使用。本試驗對上海地區(qū)多

3、個規(guī)?；翀鲞M(jìn)行了奶牛常見病毒性疾病的血清學(xué)調(diào)查，為疫病防控提供數(shù)據(jù)支持;同時采用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)獲得具有抗病毒活性的牛α、γ干擾素，為牛干擾素在奶牛臨床上的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　1上海地區(qū)規(guī)模化牧場四種奶牛病毒性疾病血清學(xué)調(diào)查對上海地區(qū)多個規(guī)?；翀龊伤固鼓膛５呐２《拘愿篂a(BVD)、牛傳染性鼻氣管炎(IBR)、牛冠狀病毒(BCV)和牛輪狀病毒(BRV)的血清學(xué)感染情況進(jìn)行調(diào)查。使用ELISA檢測方法對19個規(guī)?；翀龅腂VDV血

4、清抗原、IBRV血清抗體;9個規(guī)?；翀龅腂CV、BRV血清抗體進(jìn)行檢測。檢測BVDV、IBRV血清樣品920份，檢測BCV、BRV血清樣品200份，并結(jié)合這些牧場的飼養(yǎng)管理、繁殖、疾病等資料數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。檢測結(jié)果表明BVDV抗原陽性率平均為3.70％，IBRV、BCV、BRV抗體陽性率分別為46.74％、97.00％、97.50％。
　　2牛α、γ干擾素的原核表達(dá)為在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá)具有抗病毒活性的重組牛干擾素α和γ，

5、將經(jīng)密碼子優(yōu)化后的牛干擾素α、γ成熟蛋白基因合成后克隆至表達(dá)載體pColdⅡ中，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行蛋白誘導(dǎo)表達(dá)，獲得可溶性牛干擾素α和γ蛋白。對誘導(dǎo)條件采用單因素比較優(yōu)化以獲得最佳誘導(dǎo)條件，結(jié)果顯示在IPTG濃度為0.64mmol/L，誘導(dǎo)溫度為15℃，誘導(dǎo)時間為9h的條件下，可溶性牛α干擾素的表達(dá)量最高;在IPTG濃度為0.32 mmol/L，誘導(dǎo)溫度為15℃，誘導(dǎo)時間為12h的條件下，可溶性牛γ干擾素