小鼠顆粒細(xì)胞中STAT1調(diào)控Cyp1b1表達(dá)機(jī)制的研究.pdf

1、雌二醇(Estradiol，E2)在卵巢中具有促進(jìn)顆粒細(xì)胞增殖及調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞分化等作用，是卵泡生長(zhǎng)發(fā)育和顆粒細(xì)胞存活的重要因子。卵泡內(nèi)雌激素的產(chǎn)生能力與代謝水平對(duì)于卵泡健康非常重要，充足的雌激素對(duì)于卵泡的發(fā)育和排卵是必不可少的。Cyp1b1是Cytochrome P4501亞家族的成員之一，在機(jī)體組織內(nèi)主要負(fù)責(zé)鹵代及多環(huán)芳烴的代謝。在小鼠卵泡內(nèi)，Cyp1b1能將雌二醇代謝成4-羥基雌二醇，降低卵泡內(nèi)雌激素的含量，且代謝產(chǎn)物4-羥基雌二醇

2、能引起卵泡顆粒細(xì)胞的凋亡。因此，研究Cyp1b1的調(diào)控表達(dá)機(jī)制對(duì)解釋卵泡發(fā)育障礙的分子機(jī)理具有重要意義。調(diào)控Cyp1b1表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子有很多，在實(shí)驗(yàn)室前期研究基礎(chǔ)上，本文挑選STAT1作為Cyp1b1的候選轉(zhuǎn)錄因子，研究在小鼠顆粒細(xì)胞中其調(diào)控Cyp1b1表達(dá)的機(jī)制。相關(guān)研究?jī)?nèi)容與結(jié)論如下:
　　(1)構(gòu)建小鼠STAT1過(guò)表達(dá)載體并將其轉(zhuǎn)染到小鼠顆粒細(xì)胞中，觀察其本身的表達(dá)情況及其對(duì)Cyp1b1表達(dá)的影響。結(jié)果表明:STAT1過(guò)表達(dá)

3、載體能在小鼠顆粒細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)，且能促進(jìn)Cyp1b1 mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白的表達(dá)。說(shuō)明STAT1確實(shí)調(diào)控Cyp1b1的表達(dá)。
　　(2)網(wǎng)站預(yù)測(cè)（http://www.cbrc.jp/research/db/ TFSEARCH.html）發(fā)現(xiàn)，STAT1在Cyp1b1的啟動(dòng)子區(qū)域有兩個(gè)綁定位點(diǎn)(binding site，BS)，分別位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的上游-908到-900區(qū)域(BS1)和下游的+486到+494區(qū)域(BS2)。構(gòu)建野

4、生型及綁定位點(diǎn)突變型Cyp1b1啟動(dòng)子區(qū)域（-1208到+818）熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒，將這些載體與STAT1過(guò)表達(dá)載體共同轉(zhuǎn)染到3T3細(xì)胞內(nèi)，比較不同轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性發(fā)現(xiàn)，與野生型相比，綁定位點(diǎn)突變后能顯著降低相關(guān)載體的熒光素酶活性。說(shuō)明網(wǎng)站預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)是正確的，STAT1直接與Cyp1b1啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合調(diào)控Cyp1b1的表達(dá)。
　　(3)只將綁定位點(diǎn)突變型Cypb1啟動(dòng)子區(qū)域熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒與STAT1過(guò)表達(dá)載體共同轉(zhuǎn)染到3T