石英粉塵對(duì)小鼠呼吸道結(jié)構(gòu)及黏蛋白MUC5B表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　探討石英粉塵對(duì)小鼠呼吸道結(jié)構(gòu)以及黏蛋白MUC5B表達(dá)的影響。
　　方法:
　　構(gòu)建石英粉塵染毒小鼠模型，將72只C57BL/6健康雄性小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、生理鹽水組、石英染塵組，每組共24只。采用暴露式單次氣管內(nèi)滴注的方法，給予石英染塵組小鼠氣管內(nèi)灌注2.5mg石英粉塵懸浮液，生理鹽水組小鼠灌注等量無(wú)菌生理鹽水，空白對(duì)照組小鼠不給予任何處理，于染毒后第1、7、28、84天每組各處死6只小鼠。取右肺中葉進(jìn)

2、行固定、包埋和切片，通過(guò)蘇木精-伊紅(HE)和Masson染色法觀察小鼠氣管結(jié)構(gòu)、肺組織炎性反應(yīng)及纖維化的程度;通過(guò)阿爾辛藍(lán)-過(guò)碘酸雪夫(AB-PAS)法觀察氣管黏膜層、黏膜下層及肺組織內(nèi)黏液的分泌情況;通過(guò)透射電鏡觀察主氣管黏膜層表面運(yùn)動(dòng)纖毛的超微結(jié)構(gòu);利用免疫組織化學(xué)染色法以及Western blot法檢測(cè)主氣管及肺組織中黏蛋白MUC5B的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　(1)在各時(shí)間點(diǎn)，空白對(duì)照組和生理鹽水組小鼠主氣管結(jié)構(gòu)

3、正常，氣管黏膜層表面運(yùn)動(dòng)纖毛內(nèi)的微管結(jié)構(gòu)及纖毛底部的基體排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，纖毛內(nèi)中心雙微管的極性及基體上附著的基底足的方向均具有一致性，黏膜下層黏液腺結(jié)構(gòu)正常，有少量黏液的分泌;肺組織內(nèi)支氣管、肺泡壁及肺泡間隔結(jié)構(gòu)正常，肺泡腔內(nèi)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。石英粉塵染毒后第1天，小鼠主氣管及肺部結(jié)構(gòu)基本正常，纖毛超微結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯改變;染塵后第7天，小鼠主氣管黏膜表層纖毛出現(xiàn)粘連、倒伏，部分纖毛的中心微管極性及基底足方向紊亂，黏膜下層的黏液腺增生明顯

4、，部分肺泡結(jié)構(gòu)被破壞，支氣管壁及肺泡壁出現(xiàn)輕微增厚，炎性浸潤(rùn)明顯;染塵后第28天，小鼠主氣管黏膜表層纖毛數(shù)量減少，部分纖毛微管結(jié)構(gòu)缺失或中心微管異常分離，基底足數(shù)量減少，纖毛中心微管極性及基底足方向雜亂無(wú)章，黏膜下層的黏液腺大量增生并含有大量的黏蛋白，肺組織內(nèi)支氣管及肺泡壁周圍可見(jiàn)少量膠原纖維沉積，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏液明顯增多;染塵后第84天，小鼠主氣管黏膜表層的纖毛大量缺失，纖毛軸絲內(nèi)的微管及基底足結(jié)構(gòu)幾乎不可辨，肺組織內(nèi)支氣管壁周

5、圍炎性反應(yīng)明顯，膠原纖維增多，管壁增厚，管腔變窄。
　　(2)黏蛋白MUC5B主要定位在氣管黏膜下層腺體中及肺組織內(nèi)肺泡間隔中表達(dá);與同時(shí)間點(diǎn)的空白對(duì)照組和生理鹽水組比較，氣管及肺組織內(nèi)的黏蛋白MUC5B表達(dá)均顯著性增高(P＜0.01)，且隨染毒時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高，在染塵后28天達(dá)到高峰，染塵后84天MUC5B表達(dá)水平低于染塵后28天，但接近于染塵后第7天的表達(dá)水平，且肺組織中的MUC5B表達(dá)水平在各時(shí)間點(diǎn)均低于同期主氣管中MU