海產品中副溶血弧菌的分子鑒定與分型.pdf

1、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)為革蘭氏陰性的短桿菌,常存在魚類和貝類等海產品中,分布于海岸線等世界各地.在沿海地區(qū)和國家,該菌為首要的病原引起食物中毒之一.此菌主要通過消化道感染,患者出現(xiàn)腹瀉、腹部痙攣、惡心、嘔吐、發(fā)熱,甚至脫水、昏迷等癥狀,副溶血弧菌引起的食物中毒多發(fā)生在夏季節(jié).流行病學調查結果表明,該病主要因誤食含該病原菌污染或處理不當?shù)暮．a品而引起.但由于該菌在海產品生產過程中可通過各種途徑進

2、入成品食品中,在多種海產品成品中存在,對消費者健康構成潛在威脅.因此,建立副溶血弧菌的快速簡便的鑒定和分子分型方法,對于開展海產品生產加工過程中副溶血弧菌污染源調查和控制,提高食品的微生物衛(wèi)生質量具有重要意義.以具有副溶血弧菌種特異性的不耐熱溶血素基因(tl)和旋轉酶B(gyrB)為靶目標,建立雙重聚合酶鏈反應(PCR)方法以鑒別弧菌屬中的副溶血弧菌.雙重PCR方法檢測Vp標準株,均有高度靈敏性和特異性.進行雙重PCR檢測,可出現(xiàn)2個條

3、帶,其中1條為gyrB基因的特征性條帶(285 bp),另一條為tl基因片段(450 bp),對人工污染蝦肉醬的6 h預增菌培養(yǎng),副溶血弧菌的檢測底限為2.5×10<'0>~10<'1>CFU/g.建立的雙重PCR法可用于海產品中副溶血弧菌的特異性鑒定.我們用此方法檢測了182份新鮮和冷凍海產品,對其中46個在選擇性平板上疑似菌落進行了二重PCR和生化鑒定,有32株為副溶血弧菌,這些分離株中沒有擴增出tdh基因.本研究還初步建立了用于追