上海地區(qū)海產(chǎn)品中副溶血弧菌的分離鑒定、分子分型及tdh基因的克隆表達(dá).pdf

1、副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus，VP）廣泛分布于沿岸海水、海底沉積物及蝦類，蟹類和貝類等海產(chǎn)品中，屬革蘭陰性短桿菌，有致病菌株和非致病菌株之分。致病菌株可引起人類腹瀉、惡心、嘔吐、腹部痙攣，嚴(yán)重的可以引起昏迷、脫水甚至死亡。因此，建立靈敏快速的檢測方法，了解副溶血弧菌在市售水產(chǎn)品的分布情況，對于食品衛(wèi)生檢測意義重大。
　　為研究副溶血弧菌流行情況及毒力基因的分布情況，從上海部分農(nóng)貿(mào)市場及海產(chǎn)品批發(fā)市場采集

2、樣品183份，共鑒定出弧菌疑似株195株?；诳醇一騡yrB測序，將195株菌株確定到種的水平，包括副溶血弧菌（Vibrioparahaemolyticus）菌株137株（占70.3％）、溶藻弧菌（Vibrioalginolyticus）24株（占12.4％）、創(chuàng)傷弧菌(Vibriovulnificus)13株（占6.7％）和納瓦拉孤菌（Vibrionavarrensis）3株（占1.6％）。選取副溶血弧菌的4種主要毒力因子:耐熱直接

3、溶血素（tdh）、耐熱相關(guān)溶血素（trh）和Ⅲ型分析系統(tǒng)結(jié)構(gòu)蛋白基因（vcrD1和vcrD2），進(jìn)行PCR檢測。結(jié)果顯示，vcrD1檢出率為100％，其它3種基因分別為tdh(1.5％)，trh(0％)，vcrD2(0.74％)。
　　采用ERIC-PCR方法對2011～2013年分離的副溶血弧菌菌株及標(biāo)準(zhǔn)株基因組DNA進(jìn)行分型，結(jié)果顯示副溶血弧菌采用此種分型方法能得到多態(tài)性較好的指紋圖譜，能擴(kuò)增出2至14個大小在100bp到40

4、00bp之間的條帶，將137株分為6群和16類，不同月份及來源樣品有聚類趨勢。分型結(jié)果與菌株的致病力有一定的相關(guān)性。ERIC-PCR分型快速簡單，且較其他分子分型技術(shù)具備不要求模板序列已知而直接進(jìn)行擴(kuò)增的優(yōu)點(diǎn)，適用于大量副溶血弧菌的快速分型研究，能夠為副溶血弧菌食物中毒事件的預(yù)防和流行病學(xué)調(diào)查提供參考依據(jù)。
　　對副溶血弧菌耐熱直接溶血素基因（tdh）進(jìn)行克隆、原核表達(dá)與免疫活性分析。結(jié)果表明，重組TDH蛋白主要以包涵體形式在大腸