通心絡聯(lián)合阿托伐他汀、阿司匹林對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期勁動脈外膜滋養(yǎng)血管新生相關炎癥機制的影響.pdf

1、目的:本研究通過采用單側頸動脈硅膠管包裹聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)[16]的方法，建立新西蘭兔動脈粥樣硬化(Atherosclerosis AS)早期模型并進行藥物干預，通過觀察新西蘭兔AS早期頸動脈形態(tài)、血脂變化、頸動脈外膜與滋養(yǎng)血管(Vasa Vasorum VV)新生相關因子和炎癥因子的表達等，以深入探討“金三角”方案（ATS方案[17]）即阿托伐他汀+通心絡+阿司匹林聯(lián)合應用對新西蘭兔AS早期模型及管壁VV新生相關炎癥機制的干預作用，為中

2、西醫(yī)結合防治AS早期病變提供新思路，開辟新途徑。
　　方法:
　　1、“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期模型的干預作用
　　將90只健康雌雄各半新西蘭白兔適應性喂養(yǎng)2周后，隨機地分為:對照組;模型組;通心絡組(TXL);阿托伐他汀組(ATO);阿司匹林組(ASP);“金三角”組(ATS);每組15只，對照組給予普通飼料，模型組及各用藥組動物均實施單側頸動脈硅膠管包裹術復合高脂飼料喂養(yǎng)。根據(jù)人與動物用藥量體表面積計

3、算法及有關文獻報道:臨灌胃時用0.5％的羧甲基纖維素鈉水溶液將通心絡超微粉、阿托伐他汀和阿司匹林配成相應濃度的混懸液，體積均為3ml·Kg-1，其中TXL組以通心絡超微粉混懸液0.3g·Kg-1·d-1灌胃;ATO組予阿托伐他汀混懸液2.5mg·Kg-1·d-1灌胃;ASP組給予阿司匹林混懸液12mg·Kg-1·d-1灌胃;ATS組給予通心絡超微粉混懸液0.3g·Kg-1·d-1加阿托伐他汀混懸液2.5mg·Kg-1·d-1加阿司匹林混

4、懸液12mg·Kg-1·d-1灌胃，對照組和模型組給予等體積的0.5％的羧甲基纖維素鈉水溶液灌胃，連續(xù)喂養(yǎng)4周后取材，HE染色后利用光鏡觀察包管處頸動脈病理形態(tài)變化;生化法檢測血清TC、TG、LDL-C水平;彩色微球檢測AS早期頸動脈血流灌注情況。
　　2、“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜滋養(yǎng)血管新生的干預作用
　　在成功建立AS早期模型的基礎上，進一步探討“ATS”方案對頸動脈外膜上與VV新生相關因子表達

5、的影響，實驗造模、分組、給藥及取材方法同第一部分。于實驗末，免疫組化法檢測頸動脈外膜CD34表達情況;RT-PCR、Western blot檢測頸動脈組織血管生長因子及其受體(VEGF、VEGFR-2)的表達情況;ELISA法檢測血管外膜內(nèi)皮抑素(Endostatin ES)的表達水平。
　　3、“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜炎癥機制的干預作用
　　本部分是在前兩部分實驗的基礎上，對ATS方案干預AS早期

6、頸動脈外膜上與血管新生相關炎癥因子及與頸動脈外膜VV新生相關炎癥機制涉及分子信號轉導通路的作用進行更深層次的觀察。實驗造模、分組、給藥及取材方法同第一部分，實驗末，RT-PCR檢測頸動脈組織單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、NF-κB的表達情況;ELISA法測定各組頸動脈包裹段外膜白介素-6(IL-6)表達水平，免疫組化法檢測血管外膜MCP-1、IL-8、NF-κB表達情況，Western blot檢頸動脈組織

7、NF-κB的表達水平。
　　結果:
　　1、“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期模型的干預作用
　　1.1各組頸動脈形態(tài)觀察
　　1.1.1頸動脈HE染色結果
　　對照組:內(nèi)皮細胞完整，胞核扁平，與內(nèi)彈力板貼合緊密。中層平滑肌細胞排列整齊;模型組:內(nèi)膜層不完整，內(nèi)皮細胞部分脫落，內(nèi)膜層明顯增厚，可見少量泡沫狀巨噬細胞形成;各用藥組內(nèi)膜層部分增厚，但較模型組程度減輕，以ATO組、TXL組及ATS組改善明顯

8、。
　　1.2各組血脂變化
　　與對照組比較，模型組血清中TC、TG、LDL-C表達水平顯著升高(P＜0.01)，除阿司匹林組外，與模型組比較，各用藥組血清TC、TG、LDL-C表達水平降低(P＜0.01，P＜0.05);ATS組與TXL組、ATO組、ASP組比較，血清TC、TG、LDL-C表達水平降低(P＜0.01)，其余各用藥組間比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　1.3彩色微球檢測AS早期微血管灌注情況

9、>　　與對照組比較，模型組頸動脈微血管血流量增加(P＜0.01);其余各用藥組較模型組頸動脈微血管血流量減少（P＜0.01）;與其他各用藥組比較，ATS組微血管血流量明顯減少(P＜0.01);ATO組與ASP組比較微血管血流量減少(P＜0.05)，TXL組、ASP組組間比較統(tǒng)計學差異無顯著性(P＞0.05)。
　　2、“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜滋養(yǎng)血管新生的干預作用
　　2.1各組頸動脈外膜CD34表

10、達水平
　　與對照組比較，模型組CD34在頸動脈外膜新生VV處表達增多;與模型組比較，各用藥組頸動脈外膜上CD34表達減少。
　　2.2各組頸動脈組織VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表達水平
　　與對照組比較，模型組VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA表達明顯升高，(P＜0.01);與模型組比較，各用藥組VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA表達均明顯降低(P＜0.01，P＜0.05);與其他用藥組比較，ATS

11、組VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA表達降低(P＜0.01)，TXL組、ATO組及ASP組組間比較統(tǒng)計學差異無顯著性(P＞0.05)。
　　與對照組比較，模型組VEGF、VEGFR-2蛋白表達明顯升高，(P＜0.01);與模型組比較，各用藥組VEGF、VEGFR-2蛋白表達均明顯降低(P＜0.01，P＜0.05);ATS組VEGF、VEGFR-2蛋白表達低于TXL組、ATO組及ASP組（P＜0.01，P＜0.05）;與ASP

12、組比較， TXL組、ATO組VEGFR-2蛋白表達均明顯降低(P＜0.05)，TXL組、ATO組組間比較統(tǒng)計學差異無顯著性(P＞0.05)。
　　2.3各組頸動脈外膜組織ES的表達水平
　　與對照組比較，模型組ES表達明顯減少(P＜0.01);與模型組比較，各用藥組ES表達明顯增多(P＜0.01);與其他各用藥組比較，ATS組ES表達增多(P＜0.01);與ASP組比較，TXL組、ATO組ES表達增多（P＜0.01），TXL

13、組、ATO組組間比較統(tǒng)計學差異無顯著性(P＞0.05)。
　　3、“金三角”方案對新西蘭兔動脈粥樣硬化早期頸動脈外膜炎癥機制的干預作用
　　3.1各組頸動脈組織MCP-1 mRNA、IL-8mRNA、IL-6的表達水平
　　與對照組比較，模型組MCP-1 mRNA、IL-8mRNA、IL-6表達明顯升高(P＜0.01);各用藥組與模型組比較，MCP-1mRNA、IL-8mRNA、IL-6表達降低(P＜0.01，P＜0.

14、05);ATS組與其他用藥組分別比較，MCP-1mRNA、IL-8mRNA、IL-6表達降低(P＜0.01);其他各用藥組之間兩兩比較統(tǒng)計學差異無顯著性(P＞0.05)。
　　3.2各組頸動脈外膜MCP-1、IL-8、NF-κB的表達水平
　　與對照組比較，模型組MCP-1、IL-8、NF-κB在血管外膜VV處表達增多;與模型組比較，各用藥組頸動脈外膜上MCP-1、IL-8、NF-κB表達減少。
　　3.3各組頸動脈核

15、NF-κB基因和蛋白的表達水平
　　與對照組比較，模型組NF-κB基因和蛋白表達明顯升高(P＜0.01);與模型組比較，TXL、ATO、ASP、ATS組NF-κB基因和蛋白表達明顯降低(P＜0.01);ATS組NF-κB基因和蛋白表達均低于其他用藥組(P＜0.01，P＜0.05)，其余組間比較統(tǒng)計學差異無顯著性（P＞0.05）。
　　結論:
　　本研究采用單側頸動脈硅膠管包裹聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)建立AS早期模型，同時給予藥