不同誘導(dǎo)時間下大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成骨的差異.pdf

1、目的：觀察誘導(dǎo)時機的不同對大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響。
　　 方法：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）來源于SD大鼠,雌雄不分，體重在150-200g（由山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供）。取其腹股溝處脂肪墊，分離、純化、培養(yǎng)，傳至第三代，將細(xì)胞分為誘導(dǎo)組和非誘導(dǎo)組。誘導(dǎo)組又分為，在細(xì)胞接種同時(A組)，50％-60％融合時(B組)，85％-95％融合時(C組)分別加入同一濃度的由地塞米松、維生素C和β-甘油磷酸鈉組成的等量誘導(dǎo)

2、劑誘導(dǎo)。非誘導(dǎo)組的A、B、C組由普通培養(yǎng)基培養(yǎng)不加入誘導(dǎo)劑。在誘導(dǎo)后的7，14，21，28 d進行鈣鈷染色、茜素紅染色、堿性磷酸酶活性的檢測來判斷各組細(xì)胞的成骨能力，并且定期在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化及生長狀況。
　　 結(jié)果：
　　 1.相同初始接種密度，誘導(dǎo)組細(xì)胞生長速度略慢于同期非誘導(dǎo)組。
　　 2.經(jīng)鈣鈷染色后，誘導(dǎo)組大部分染色的細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，細(xì)胞胞漿中可見淺棕色至棕黑色的細(xì)胞顆粒。相同初始接種密度，

3、同期比較，干預(yù)時融合度越高陽性細(xì)胞越多，以細(xì)胞達85％-95％融合時誘導(dǎo)組出現(xiàn)結(jié)節(jié)數(shù)量最多、體積最大；非誘導(dǎo)組未見片狀強陽性細(xì)胞及明顯結(jié)節(jié)形成。
　　 3.茜素紅染色后，誘導(dǎo)組從第7d開始可見少量散在紅色結(jié)節(jié)，到28d呈現(xiàn)大片紅色致密結(jié)節(jié)。同期相比，以誘導(dǎo)組細(xì)胞達85％-95％融合時形成結(jié)節(jié)早，且結(jié)節(jié)數(shù)量多、體積大，非誘導(dǎo)組未見明顯陽性結(jié)節(jié)形成。
　　 4.細(xì)細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性檢測表明：誘導(dǎo)組與同期非誘導(dǎo)組相比細(xì)胞內(nèi)堿

4、性磷酸酶活性明顯提高（P＜0.05），表現(xiàn)細(xì)胞成骨分化特點。誘導(dǎo)組組內(nèi)比較，第7天A組與B組無明顯差別（P＞0.05），與C組比較有明顯差別（P＜0.01），C組高；第14與21天A、B、C組間比較均有差異（P＜0.01），C組＞B組＞A組；第28天A組與B、C組比較有差異（P＜0.05），A組低，B組與C組比較無明顯差異（P＞0.05）。非誘導(dǎo)組內(nèi)各組比較無明顯差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.ADSCs