含透明質酸PADM與自體斷層皮復合移植對兔創(chuàng)面愈合質量的影響及其機制研究.pdf

1、目的：將添加外源性透明質酸(hyaluronic acid,HA)的異種(豬)去細胞真皮基質(porcine acellular dermal matrix,PADM)與薄自體皮片復合移植于兔全層皮膚缺損創(chuàng)面,從復合移植皮片攣縮率及生物力學性能角度評價其對創(chuàng)面愈合質量的影響。繼而從皮片血管化、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的表達、HA及受體變化探討其發(fā)生作用的機制。
　　 方法：⑴取日本大耳白兔20只,制作背部皮膚全層缺損創(chuàng)面模型,創(chuàng)面按處

2、理方式的不同隨機分為5組:HA1+PADM+薄自體皮組(HA1組)、HA2+PADM+薄自體皮組(HA2組)、PADM+薄自體皮組(PADM組)、薄自體皮移植組(TS組)、正常皮膚組(NS組),每個創(chuàng)面5cm×3cm大小。于術后28d、56d觀察創(chuàng)面愈合情況,計算皮片攣縮率；取移植區(qū)域組織標本行病理學檢查,觀察膠原結構以及移植物與周圍組織融合情況；采用 ZWICK萬能材料試驗機檢測移植后皮膚組織的松弛、蠕變、應力-應變等生物力學指標,對

3、結果進行統(tǒng)計學分析。⑵取日本大耳白兔50只,制作背部皮膚全層缺損創(chuàng)面模型,創(chuàng)面按處理方式的不同隨機分為5組:HA1+PADM+薄自體皮組(SHA1組)、HA2+PADM+薄自體皮組(SHA2組)、PADM+薄自體皮組(SPADM組)、薄自體皮移植組(STS組)、正常皮膚組(SNS組),每個創(chuàng)面3cm×3cm大小。術后3d、7d、14d、28d、56d分別切取移植區(qū)域組織標本,行HE染色觀察結構變化；免疫組化檢測血管內皮細胞標志物CD31

4、,并計算微血管密度(microvesseldensity,MVD)；用免疫組化和Western blotting方法對復合植皮組織中Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白的表達進行定性和定量檢測；ELISA實驗檢測CD44的表達；放射性免疫方法檢測HA濃度,對結果進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：①皮片攣縮率:術后28d,TS組攣縮率最大(p<0.05),PADM組、HA1組與HA2組之間無差異(p>0.05)；術后56d,PADM組與TS組攣縮率最大

5、(p<0.05),HA2組攣縮最小(p<0.05)。②生物力學：松弛曲線顯示,術后28d,HA2組與Ns組曲線最接近,HA1組與TS組最接近。術后56d,HA2組、HA1組與NS組曲線最接近,PADM組偏離NS組最大；蠕變曲線顯示,術后28d,PADM組與NS組曲線最接近,其次為TS組、HA2組,HA1組距離NS組曲線稍遠。術后56d,實驗各組與NS組曲線十分接近；應力-應變曲線顯示,術后28d和56d,HA2組與NS組最接近,在相同應

6、變下的應力最小的,皮膚柔韌性最好,但能承受的最大應力較小,皮膚的強度差；PADM組偏離NS組最遠,較其它組彈性差,但能夠承受較大的應力,強度最好；HA1組與TS組最接近。③MVD:術后3d,SHA1組與SHA2組未見毛細血管,STS組與SPADM組出現(xiàn)毛細血管(p<0.01)；術后7d,SHA1組和SHA2組出現(xiàn)毛細血管,SPADM組與SHA1組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05),SHA2組MVD值高于SPADM組與SHA1組,STS

7、組又高于SHA2組(p<0.01)；術后14d,SPADM組與STS組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05),SHA1組MVD值高于SPADM組與STS組,SHA2組又高于SHA1組(p<0.01)；移植后28d、56d,MVD值依次為SHA2組>SHA1組>STS組>SPADM組>SNS組(p<0.01).從3d至56d,各實驗組的MVD值都經歷了先上升后下降的過程(p<0.01)。④Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白表達:術后28d和56d,SHA1

8、組,SHA2組Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白含量較SPADM組高(p<0.05),其中SHA2組Ⅰ型、Ⅲ型膠原高于SHA1組(p<0.05)。⑤CD44含量:術后3d、7d,SHA1組、SHA2組和SPADM組之間差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),SHA2組>SHA1組>SPADM組；術后14d,SHA1組和SHA2組之間無差異(p>0.05),SPADM組中CD44含量高于SHA1組和SHA2組(p<0.05):術后28d,SHA1組和SPADM

9、組之間無差異(p>0.05),SHA2組中CD44含量低于SHA1組和SPADM組(p<0.05)；術后56d,SHA1組和SPADM組之間無差異(p>0.05),二組均低于SHA2組(p<0.05)。⑥HA濃度:術后3d,SHA1組和SHA2組之間無差異(p>0.05),二組的HA濃度高于SPADM組(p<0.05)；術后7d,SHA1組、SHA2組和SPADM組之間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；術后14d,SHA1組和SHA2組

10、之間無差異(p>0.05),SPADM組的HA濃度高于SHA1組和SHA2組(p<0.05)；術后28d,SHA1組和SPADM組之間無差異(p>0.05),SHA2組的HA濃度低于SHA1組和SPADM組(p<0.05)；術后56d,SHA1組和SPADM組之間無差異(p>0.05),SHA2組的HA濃度高于SHA1組和SPADM組(p<0.05)。
　　 結論：外源性HA可減輕兔創(chuàng)面復合皮移植后的皮片攣縮,提高復合皮移植后創(chuàng)