葉酸功能化納米鉆石載藥體系的制備及體外細(xì)胞靶向性的研究.pdf

1、化療是腫瘤疾病治療的主要方案之一,但是其最大的缺陷是對腫瘤組織和正常組織無選擇識別性,導(dǎo)致在治療過程中給腫瘤患者帶來嚴(yán)重的毒副作用。基于腫瘤細(xì)胞表面過度表達(dá)可與特異性配體結(jié)合的受體,采用特異性配體將抗癌納米藥物通過受體介導(dǎo)途徑輸送到特定的靶部位,提高治療效果,降低對正常組織的毒副作用。隨著納米醫(yī)學(xué)的發(fā)展,有關(guān)納米材料用于藥物靶向輸送的研究已引起廣泛的興趣。通常使用的特異性配體有葉酸、脂蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、多肽類等,其中葉酸是一種具有低免疫原

2、性并易于其它物質(zhì)進(jìn)行共價偶聯(lián)的小分子物質(zhì),基于癌細(xì)胞表面超表達(dá)的葉酸受體與葉酸分子的高度親和性,用葉酸修飾的納米載藥體系,可實現(xiàn)對腫瘤的靶向治療。
　　本論文主要以納米鉆石(NDs)為載體,化療藥物阿霉素(DOX)為藥物模型,葉酸(FA)為靶向配體分子,制備了ND-PEG-FA/DOX納米藥物,運(yùn)用激光掃描共聚焦顯微鏡成像法、流式細(xì)胞術(shù)和MTT比色法等研究了ND-PEG-FA/DOX與細(xì)胞的作用。主要研究內(nèi)容包括:
　　1.

3、以NDs為載體,聚乙醇二胺(H2N-PEG-NH2)作為嵌段共聚物將配體小子FA通過化學(xué)共價鍵修飾于NDs表面制備得ND-PEG-FA靶向載體,采用紅外光譜法對其表面官能團(tuán)進(jìn)行了表征,運(yùn)用紫外-可見分光光度法和熒光光度法計算NDs表面偶聯(lián)H2N-PEG-NH2和FA的量分別為200μg/mg和44μg/mg。
　　2.利用物理吸附作用將DOX負(fù)載于ND-PEG-FA納米顆粒上,得到ND-PEG-FA/DOX納米靶向載藥系統(tǒng)。首先研

4、究了ND-PEG-FA與DOX相互作用達(dá)到飽和平衡狀態(tài)時的條件;其次探討了不同pH值條件下,ND-PEG-FA/DOX納米藥物體外釋藥行為。結(jié)果表明ND-PEG-FA與DOX相互作用達(dá)到飽和平衡狀態(tài)的最佳時間為6h,最大吸附DOX的量為(47±1.26)μg/mg;體外釋藥實驗說明ND-PEG-FA/DOX藥物在pH5.0(模擬細(xì)胞內(nèi)涵體環(huán)境)和pH6.5(模擬腫瘤環(huán)境)比pH7.4(模擬生理環(huán)境)時釋藥速率快且釋藥總量較大,揭示了ND

5、-PEG-FA/DOX藥物在血液循環(huán)中有較少的藥物釋放,可以減少對正常組織的損傷。
　　3.以細(xì)胞表面葉酸受體表達(dá)量不同的HeLa、C6、HepG2和HEK293作為體外模型組。MTT比色法檢測結(jié)果表明NDs、ND-PEG-NH2和ND-PEG-FA材料幾乎無細(xì)胞毒性;采用流式細(xì)胞術(shù)研究了細(xì)胞對ND-PEG-FA/DOX納米藥物的攝取具有時間、濃度、溫度、能量依賴性而且是以網(wǎng)格蛋白(clathrin)介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑進(jìn)入細(xì)胞,此外N