長(zhǎng)循環(huán)靶向性載藥膠束的構(gòu)建及其細(xì)胞水平評(píng)價(jià).pdf

1、聚合物膠束是當(dāng)前藥物傳輸領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，在用作藥物載體時(shí)具有多個(gè)優(yōu)點(diǎn)，如對(duì)疏水性或難溶性藥物的增溶作用，聚合物親水鏈由一定長(zhǎng)度的聚乙二醇等組成時(shí)可具備長(zhǎng)循環(huán)性，而在聚合物膠束的表面修飾以靶識(shí)別分子可使其具備主動(dòng)靶向性。本文制備了載香豆素6和米托蒽琨的聚合物膠束，并研究了地塞米松處理對(duì)Hela細(xì)胞攝取葉酸偶聯(lián)載香豆素6膠束的影響。
　　 首先，以雙氨基PEG（PEG-bis-amine）、葉酸(folate)、磷脂酰乙醇胺(1，2

2、-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine，DSPE)為原料合成了葉酸-PEG-磷脂酰乙醇胺(folate-PEG-DSPE)，并利用傅立葉紅外波譜儀和核磁共振譜儀對(duì)終產(chǎn)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征，結(jié)果證實(shí)所得到的終產(chǎn)物為目標(biāo)化合物;還利用高效液相色譜法對(duì)得到的終產(chǎn)物進(jìn)行了含量分析;然后，以甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(mPEG-DSPE)和合成的葉酸-PEG-磷脂酰乙醇胺(folate-

3、PEG-DSPE)為材料，通過(guò)膜水化法制備出載香豆素6(coumarin6)的普通膠束(plain micelles)和葉酸偶聯(lián)膠束(folate-conjugated micelles)。分別采用透射電鏡和激光粒度分析儀對(duì)膠束的形態(tài)和粒徑分布進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)透射電鏡下的干燥膠束粒徑約50-60nm，而溶液狀態(tài)下的膠束平均粒徑約100nm;還利用高效液相色譜法分別檢測(cè)了膠束溶液的香豆素6濃度，并計(jì)算出了聚合物膠束的載藥量和包封率分別約為

4、0.8％和15.4％;此外，還利用高效液相色譜法檢測(cè)了葉酸偶聯(lián)膠束中的folate-PEG-DSPE，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，膜水化法是制備載藥聚合物膠束的適宜方法，所制備的葉酸偶聯(lián)膠束含有folate-PEG-DSPE。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，聚合物膠束對(duì)于疏水性小分子藥物具有顯著的增溶作用;
　　 其次，以甲氧基聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺為材料，利用膜水化法制備包載水溶性較好的蒽環(huán)類抗腫瘤藥米托蒽醌鹽酸鹽(mitoxantrone hydroch

5、loride)的聚合物膠束，考察了磷脂酰乙醇胺對(duì)米托蒽琨包封率和載藥量的影響。動(dòng)態(tài)光散射法考察了膠束的粒徑分布，其平均粒徑約10nm;發(fā)現(xiàn)磷脂酰乙醇胺的添加可以使聚合物膠束對(duì)米托蒽醌的包封率和載藥量增加達(dá)23％左右;
　　 然后，考察了葉酸受體α陽(yáng)性的Hela細(xì)胞對(duì)載香豆素6的普通膠束和葉酸偶聯(lián)膠束的體外攝取實(shí)驗(yàn)，利用熒光顯徼鏡和流式細(xì)胞儀考察Hela細(xì)胞對(duì)于葉酸偶聯(lián)膠束的攝取作用，發(fā)現(xiàn)Hela細(xì)胞對(duì)于葉酸偶聯(lián)膠束的攝取明顯高于

6、普通膠束，證明通過(guò)葉酸小分子與細(xì)胞表面的葉酸受體α的特異性識(shí)別和結(jié)合作用，可以促進(jìn)細(xì)胞對(duì)于葉酸偶聯(lián)載藥膠束的攝取;
　　 最后，研究了地塞米松處理對(duì)于Hela細(xì)胞攝取載香豆素6的葉酸偶聯(lián)膠束的影響。利用多個(gè)劑量(5nM，50nM，100nM)的地塞米松處理Hela細(xì)胞96h，并用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)了處理后Hela細(xì)胞的mRNA水平和細(xì)胞表面FRα水平，發(fā)現(xiàn)地塞米松處理后的Hela細(xì)胞的mRNA水平增加了近3

7、倍，而Hela細(xì)胞表面FRα水平增加了1倍多;在5nM地塞米松處理96h的Hela細(xì)胞中加入葉酸偶聯(lián)膠束，以未經(jīng)處理的Hela細(xì)胞為對(duì)照，采用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察細(xì)胞攝取量，發(fā)現(xiàn)地塞米松處理的Hela細(xì)胞對(duì)葉酸偶聯(lián)膠束的攝取增加了近1倍，也即說(shuō)明通過(guò)上調(diào)細(xì)胞表面FRα水平可以增強(qiáng)葉酸偶聯(lián)膠束在腫瘤細(xì)胞的內(nèi)吞。
　　 本研究成功制備了載香豆素6的普通膠束和葉酸偶聯(lián)膠束，動(dòng)態(tài)光散射法檢測(cè)的平均粒徑約100nm;此外，還制備了載