狗棗獼猴桃多酚的抗氧化與抗腫瘤效應研究.pdf

1、現代醫(yī)學研究表明自由基具有強氧化性,攻擊生物大分子,損害機體的組織和細胞,導致癌癥、炎癥、心臟病、心血管疾病、糖尿病等近百種疾病的發(fā)生,因此評價和篩選具有抗氧化功能的天然抗氧化物已經成為現代生命科學研究的熱點問題。本文以獼猴桃多酚為研究對象,采用活性跟蹤方法,獲得活性最強的狗棗獼猴桃多酚,并進行組成成分分析。系統(tǒng)地分析了狗棗獼猴桃多酚的體外抗氧化活性及抗惡性腫瘤增殖活性,并對其體內氧化損傷的防護作用以及體內抗腫瘤作用進行了相關性分析。<

2、br>　　系統(tǒng)地分析了獼猴桃多酚的體外抗氧化和抗惡性腫瘤增殖活性。通過總還原能力、清除生理性自由基(羥基自由基、超氧自由基)、非生理性自由基(ABTS、DPPH)、抗脂質過氧化能力分析,發(fā)現狗棗獼猴桃具有最低的IC50值,其抗氧化能力最強,其次是軟棗獼猴桃、中華獼猴桃,并發(fā)現其抗氧化能力與總多酚含量之間具有很好的相關性,相關系數大于0.7。研究了三種獼猴桃多酚抑制HepG2、HT-29、HeLa以及A549細胞的增殖活性,結果表明三種獼

3、猴桃多酚均具有較好的抑制HepG2、HT-29、HeLa和A549等四種腫瘤細胞增殖的能力。
　　采用活性跟蹤的方法分離純化狗棗獼猴桃多酚。首先使用60％的乙醇輔助超聲波的方法對三種獼猴桃多酚進行提取,通過旋轉蒸發(fā)儀濃縮樣品,采用福林酚法測定總多酚含量,結果發(fā)現狗棗獼猴桃提取物中具有最高的總多酚含量,達到430.03±21.85mgGAE/100g鮮果。采用多通道二維色譜純化狗棗獼猴桃多酚,通過單因素實驗和響應面分析優(yōu)化最佳的純化

4、條件,得最佳純化條件為:上樣量57.27mL,洗脫濃度71.71%,洗脫2.85個柱體積,在此條件下,響應面預測結果獲得的總酚含量為11.99mg/mL,與實測結果差異不顯著。
　　純化的狗棗獼猴桃多酚復合物(AKP)通過HPLC-ESI-MS液質聯用技術進行分析,發(fā)現其中含有香豆酸、香草酸、綠原酸、山奈酚、兒茶素、白藜蘆醇、對香豆酸、異鼠李素3-O-葡萄糖苷、槲皮素3-O-己糖苷、槲皮素-鼠李糖苷等成分。
　　使用60Co

5、γ射線誘導小鼠建立氧化損傷模型。實驗結果表明,AKP通過促進造血功能、增加脾細胞的增殖、并刺激白介素IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的產生,提高機體的免疫力,顯著的降低了輻射對機體造成的傷害。同時還激活體內抗氧化酶系統(tǒng),增加了體內超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px),抑制脂質過氧化反應的發(fā)生,降低體內丙二醛(MDA)的水平,提高非酶系統(tǒng)抗氧化物質谷胱甘肽(GSH)的含量,抵抗機體在

6、氧化損傷過程中產生的過量自由基。結果表AKP在激活體內抗氧化物酶系統(tǒng)的同時,抑制氧化酶系的活性,降低脂質過氧化反應的發(fā)生,有效的保護細胞的完整性,降低骨髓微核率和染色體畸變的產生,進一步驗證了AKP對輻射誘導的氧化損傷的防護作用。
　　使用S180實體瘤接種小鼠建立惡性腫瘤模型,結果表明AKP能夠顯著提高了腫瘤小鼠的存活時間,低、中、高劑量組對S180實體瘤的抑制率分別為20.91%,38.17%和44.27%,同時藥物通過促進脾

7、淋巴細胞的增殖,顯著提高脾臟指數和胸腺指數,進一步提高機體的免疫力。機體免疫系統(tǒng)能夠有效的識別腫瘤細胞并發(fā)生應答,從而達到抗腫瘤的目的。
　　通過DNALadder實驗發(fā)現AKP能夠顯著的誘導HepG2、HeLa細胞凋亡,表現出特征性的梯度條帶。進一步通過細胞周期分析發(fā)現AKP能夠阻滯HepG2細胞在G2/M期,而阻滯HeLa細胞在G0/G1期,使癌細胞增殖速度減慢,從而誘導細胞凋亡。這表明AKP能夠通過多種途徑誘導細胞的凋亡,達