高表達(dá)耐熱鏈霉菌acyB基因及其固定化發(fā)酵生產(chǎn)AIV研究.pdf

1、乙酰異戊酰泰樂菌素(AIV)是一種高效、不易產(chǎn)生耐藥性的獸用抗生素。其由tylosin轉(zhuǎn)化發(fā)酵AIV的產(chǎn)物濃度較低，因此有必要構(gòu)建高產(chǎn)AIV生產(chǎn)菌株，并建立適合工業(yè)化生產(chǎn)的發(fā)酵工藝條件。
　　本研究首先克隆了原始菌株中活性較低的異戊?；D(zhuǎn)移酶基因（acy B1-B2），通過選擇不同的質(zhì)粒載體pIB139和pUWL201，構(gòu)建了acy B1-B2重組載體，運(yùn)用接合轉(zhuǎn)移的方法導(dǎo)入SP.11416中，得到最優(yōu)重組菌株SP.11432，其

2、發(fā)酵產(chǎn)物AIV濃度是原始菌株SP.11416的2倍。同時(shí)探究了重組菌株SP.11432和原始菌株 SP.11416在耐受乙酰異戊酰泰樂菌素、泰勒菌素和安普霉素的差異性，其結(jié)果表明，重組菌株 SP.11432的耐受乙酰異戊酰泰樂菌素、泰勒菌素和安普霉素的能力比原始菌株SP.11416有很大的提高。
　　其次，以固定菌體量為指標(biāo)，在不同的固定化材料中選出最優(yōu)的固定化材料聚氨酯泡沫（PUF），根據(jù)耐熱鏈霉菌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)特性和菌體表面呈現(xiàn)

3、電負(fù)性的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)改造出不同的改性 PUF固定化材料。綜合考慮每種改性材料的最大菌體固定量和產(chǎn)物AIV濃度，確定陽性-交聯(lián)型聚氨酯泡沫（PCPUF）為耐熱鏈霉菌SP.11432固定化材料。并研究了其菌體固定化條件。
　　最后，經(jīng)80小時(shí)的單批發(fā)酵結(jié)果表明，以PCPUF為載體固定化重組SP.11432菌株進(jìn)行發(fā)酵，得到AIV最高濃度為33.54mg/L，而游離發(fā)酵的為20.34 mg/L，且固定化發(fā)酵達(dá)到最高濃度的時(shí)間比游離菌株的縮