間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)TGEV方法的建立.pdf

1、本研究用經(jīng)Ni2+-NTA金屬螯合層析柱純化后獲得純化的重組N蛋白作為抗原檢測(cè)試劑，抗重組N蛋白的單克隆抗體作為抗體診斷試劑，用非離子去污劑暴露出TGEV的核衣殼蛋白，利用競(jìng)爭(zhēng)原理針對(duì)糞便中的TGEV建立了一種快速的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法。并對(duì)方法中封閉液的選擇及工作條件進(jìn)行了確定，結(jié)果表明0.5％聚乙烯醇在37℃封閉2h效果最理想。該方法對(duì)感染TGEV的20頭份仔豬的糞便樣品進(jìn)行檢測(cè)，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)仔豬糞便樣品的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行了分

2、析，確定了陽(yáng)性值判定標(biāo)準(zhǔn)為：在陰性對(duì)照(N)OD492nm＞0.9情況下，抑制率大于14.5％為陽(yáng)性。特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，建立的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA對(duì)豬輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒等腸道病毒的檢測(cè)均為陰性反應(yīng)。 以TGEVTH-98株的強(qiáng)毒株人工口服感染未進(jìn)初乳的初生仔豬，24h后收集仔豬糞便樣品，用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA和RT-PCR方法分別對(duì)糞便進(jìn)行病原體檢測(cè)，結(jié)果表明，在仔豬感染62h以后，用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法可檢測(cè)到在腸道內(nèi)