魚糜制品中大豆蛋白的檢測(cè).pdf

1、簍萎大學(xué)碩士學(xué)位論文魚糜制品中大豆蛋白的檢測(cè)Detectionofsoybeanproteinsinsurimiproducts魚糜制品中大豆蛋白的檢測(cè)摘要近年來，隨著魚糜制品產(chǎn)量的不斷增加，魚糜原料價(jià)格的不斷上漲，向魚糜制品甚至原料魚漿中添加價(jià)格較低的大豆蛋白代替魚肉蛋白的現(xiàn)象經(jīng)常出現(xiàn)，嚴(yán)重?fù)p害了消費(fèi)者的權(quán)益。本研究以大豆蛋白中熱穩(wěn)定性良好的大豆胰蛋白酶抑制劑(Soybeantrypsininhibitor，STI)及p伴大豆球蛋白的

2、p亞基為目標(biāo)蛋白，制備抗體并建立高效靈敏的大豆蛋白檢測(cè)方法，為魚糜制品中大豆蛋白檢測(cè)試劑盒的研發(fā)提供技術(shù)支持。大豆粉通過丙酮浸泡、酸處理、硫酸銨鹽析、DEAE—Sephacel及SPSepharose離子交換層析柱的純化，最終獲得高純度的STI。將STI經(jīng)110℃處理30min后作為抗原，免疫新西蘭雄兔(從小喂養(yǎng)不含大豆蛋白的飼料)，制備抗STI多克隆抗體。通過免疫喂養(yǎng)不含大豆蛋白飼料的BALB／c小鼠制備了1種單克隆抗體(A116)。

3、并分別采用ProteinASepharose及ProteinGSeplaarose柱層析法對(duì)抗體進(jìn)行純化。分別將制備的多克隆抗體及單克隆抗體進(jìn)行大豆蛋白免疫檢測(cè)方法的構(gòu)建。以抗STI多克隆抗體建立的cELISA法，最低檢測(cè)限為24nagSPI／kg食物，對(duì)含5、10、20mg／g大豆分離蛋白的魚漿進(jìn)行回收率分析，回收率為76O％～109O％。利用抗STI單克隆抗體(A116)建立的傳統(tǒng)的Westernblot法及免疫熒光法最低檢測(cè)限分別

4、為50mgSPI／kg食物、1875mgSPI／kg食物。兩種方法均能對(duì)魚糜制品中大豆進(jìn)行半定量分析，但傳統(tǒng)的Westernblot法的靈敏度比免疫熒光法高，而免疫熒光法具有耗時(shí)短、安全等特點(diǎn)。對(duì)傳統(tǒng)的Westernblot法的檢測(cè)準(zhǔn)確度進(jìn)行分析，回收率為819％一一987％。同時(shí)，以A116為包被抗體、抗STI多克隆抗體為檢測(cè)抗體，建立s—ELISA法，最低檢測(cè)限為136mgSPI／kg食物，定量限(LOQ)為617mgSPI／kg食

5、物。通過對(duì)魚丸及魚漿中的大豆蛋白進(jìn)行檢測(cè)，回收率為1001％1222％，說明建立的sELISA法準(zhǔn)確性高。本研究根據(jù)建立的sELISA法成功開發(fā)了魚糜制品中大豆蛋白定量檢測(cè)試劑盒。另一方面，通過等電點(diǎn)沉淀和QSepharose陰離子交換層析柱的純化，從大豆中得到高度純化的48kDa的蛋白質(zhì)。經(jīng)質(zhì)譜分析得到9個(gè)肽段，共175個(gè)氨基酸，與大豆中的B伴大豆球蛋白的B亞基同源性為100％，說明純化的蛋白為B伴大豆球蛋白的B亞基。以該目標(biāo)蛋白分別