肝臟部分切除對肝臟干細胞增殖的影響.pdf

1、目前,肝移植雖已成為治療終末期肝病的重要手段,但供體短缺、手術損傷、免疫排斥以及費用高昂等問題構成了肝移植技術發(fā)展的主要障礙。因此,開展具有侵入性小,并發(fā)癥少等特點的肝臟細胞移植(Hepatocyte transplantation,HTx)具有重要臨床意義。肝臟細胞移植分為肝細胞移植與肝臟干細胞移植。成熟肝細胞雖然具有一定再生能力,可在一定程度上重構肝臟,但臨床實驗中,肝細胞移植往往因為細胞數(shù)量不足或再生能力有限,而不能產(chǎn)生充分、長期

2、的生物學作用。肝臟干細胞具有長時間持續(xù)擴增的能力,能在體外擴增達到臨床所需的細胞數(shù)量,且移植后在體內(nèi)也可增生。所以,肝臟干細胞移植可能在肝臟再生治療(Therapeuticliver repopulation)中發(fā)揮更重要的作用。
　　 目的:通過肝臟部分切除的方法構建SD大鼠肝干細胞增殖模型,并檢測部分切除后存留肝臟中干細胞的增殖。
　　 方法:采用部分肝切除法建立大鼠肝葉切除模型并按切除比例分組;使用Ⅳ型膠原酶法提取

3、,分離切除部分肝臟后存留的肝臟中的細胞,貼壁后進行體外接種培養(yǎng);培養(yǎng)過程中向RPMI1640中加入肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、纖維母細胞生長因子-4(fibroblast growth factor-4,FGF-4),對貼壁細胞誘導;應用流式細胞儀檢測不同組別肝臟干細胞CD34、Thy的表達;光鏡下對比觀察各組肝臟干細胞的含量和生長情況;免疫熒光法鑒定各組肝臟干細胞AFP、CK18的表達;

4、Western Blot檢測細胞中AFP的表達并進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果:
　　 1.通過切除SD大鼠不同比例的肝葉組織構建大鼠肝葉切除的模型。
　　 2.膠原酶法提取、分離出圓形及類圓形貼壁細胞,經(jīng)體外培養(yǎng)可見細胞呈集團、集落樣生長,說明有肝臟干細胞的增殖。
　　 3.流式細胞儀檢測到肝臟部分切除后第7天存留肝臟的細胞中CD34、Thy呈陽性表達,其中CD34含量為2.6％,Thy含量為1.3%;未

5、做肝臟切除的對照組肝臟細胞中CD34、Thy呈陰性表達。
　　 4.免疫熒光檢測SD大鼠肝臟切除83.4%后存留的肝臟細胞中AFP、CK18呈強陽性表達;肝臟切除73.1%后的存留肝臟細胞中AFP、CK18呈陽性表達;在未切除的對照組中呈陰性表達。術后第7天存留肝臟細胞中AFP、CK18星強陽性表達;術后當天存留肝臟細胞中AFP、CK18呈陽性表達;術后第14天存留肝臟細胞中AFP、CK18呈陰性表達。肝臟部分切除后存留鼠肝灌洗

6、15分鐘后細胞中AFP、CK18呈強陽性表達;肝臟部分切除后存留鼠肝灌洗10分鐘后的細胞中AFP、CK18呈陽性表達;肝臟部分切除后存留鼠肝灌洗20分鐘后的細胞中AFP、CK18呈陰性表達。
　　 5.Western Blot檢測到肝部分切除后存留肝臟細胞中AFP呈陽性表達。切除肝臟83.4%后存留肝臟細胞中AFP的表達與切除73.1%后存留肝臟細胞中AFP的表達相比較,未見顯著差異,P≥0.05。存留鼠肝灌洗15分鐘后的肝臟細

7、胞與存留鼠肝灌洗10分鐘后的肝臟細胞的AFP表達相比較,明顯升高,P＜0.05。術后第7天與術后當天的存留肝臟細胞中AFP表達相比較,明顯升高,P＜0.05。
　　 結論:
　　 1.SD大鼠切除肝臟83.4%的存留肝臟含有肝臟干細胞的數(shù)量最多,切除肝臟73.1%的存留鼠肝中含有的肝臟干細胞的數(shù)量次之,未切除肝臟的鼠肝含有干細胞的數(shù)量最少。
　　 2.術后第7天存留鼠肝中肝臟干細胞的數(shù)量最多,術后當天存留鼠肝中肝