莫能菌素生物合成調(diào)控基因的敲除.pdf

1、莫能菌素是由肉桂地鏈霉菌產(chǎn)生的一種聚醚類抗生素,具有離子載體的生物活性,主要用于家禽、家兔等的抗球蟲藥物。莫能菌素的生物合成基因簇涉及20個基因,其中有3個編碼調(diào)控因子。monH屬于LAL家族正調(diào)控因子,monRI屬于正調(diào)控因子SARP類,monRII屬于TetR類負調(diào)控因子。雖然已知這三個調(diào)控基因的功能,但在莫能菌素合成途徑中的調(diào)控機理仍然未知。通過對調(diào)控基因的敲除、回補等手段,來研究調(diào)控基因?qū)δ芫厣锖铣傻挠绊?從而對莫能菌素基

2、因改造和提高莫能菌素的發(fā)酵產(chǎn)量具有十分重要的意義。
　　本文采用了豆油、豬油、油酸甲酯作為莫能菌素生物合成過程中的碳源和消泡劑。通過對肉桂地鏈霉菌培養(yǎng)基成分的調(diào)整,同時通過實驗得到pH的變化對莫能菌素的合成至關(guān)重要,莫能菌素的生物合成要控制在一個恒定的偏酸性的環(huán)境中。通過對培養(yǎng)基中氮源和微量元素比例的調(diào)整來降低發(fā)酵液的pH,從而提高并穩(wěn)定了莫能菌素的效價。
　　本文通過構(gòu)建monH的敲除載體,并通過篩選得到了雙交換的monH

3、敲除菌株。構(gòu)建了monH的過表達載體,分別轉(zhuǎn)入到敲除菌株和原始菌株中獲得回補菌株和過表達菌株。通過發(fā)酵效價測定,結(jié)果顯示,monH的敲除幾乎喪失莫能菌素合成能力,monH回補可恢復(fù)70％的產(chǎn)量,而monH過表達使產(chǎn)量提高了29%,這也證明了monH是莫能菌素生物合成基因簇中的正調(diào)節(jié)基因,對莫能菌素的合成起著直接作用。
　　本文同時還構(gòu)建了莫能菌素全基因簇敲除菌株,通過利用肉桂地鏈霉菌高效表達莫能菌素提供的前體物質(zhì)來高效異源表達其他