吲哚咔唑類生物堿產(chǎn)生菌種選育及代謝調(diào)控.pdf

1、迄今為止放線菌仍然是藥物開發(fā)的重要來源，海洋放線菌因其獨特的生存環(huán)境而進化出獨特復雜的代謝途徑，能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)復雜多樣、有特殊生理活性和潛在藥用價值的代謝產(chǎn)物。本文對實驗室所保藏的具藥用活性的海洋放線菌建立信息庫，針對65株活性海洋放線菌，通過培養(yǎng)觀察菌株的傳統(tǒng)形態(tài)學特征，生理生化試驗測試，同時對16S rDNA序列測定和比對分析，最終結(jié)合三方面信息將活性菌株鑒定到種屬。建立藥用微生物資源信息庫，詳細闡述菌株的宿主、采集時間、采集地點、學

2、名、16S rDNA序列、活性指標與生理生化特性、培養(yǎng)條件、保藏條件等，并加入菌株的菌落特征照片和菌體的顯微結(jié)構(gòu)照片。所有藥用活性海洋放線菌，分屬于7個屬，48個種;其中鏈霉菌屬59株，占總量的90.77％。
　　藥用放線菌信息庫所保藏的硝孢鏈霉菌CQT14-24（簡稱T14-24），產(chǎn)生具強抗腫瘤活性的吲哚咔唑類化合物，但產(chǎn)量低且因無特異性而毒性較大。為了提高吲哚咔唑類化合物的產(chǎn)量和獲得該化合物的衍生物，以T14-24為出發(fā)菌株

3、進行菌株選育和微生物誘導調(diào)控。經(jīng)過紫外誘變、紫外線氯化鋰誘變和亞硝酸處理，根據(jù)生物學特征挑選菌株，通過稻瘟酶模型初篩、高效液相色譜復篩、遺傳穩(wěn)定性測試，以吲哚咔唑產(chǎn)量為指標，篩選得到一株高產(chǎn)菌株5-L25-1，其代謝吲哚咔唑的能力比原始菌株提高342.28％。針對高產(chǎn)菌株5-L25-1開展原生質(zhì)體融合試驗，優(yōu)化原生質(zhì)體再生條件為:甘氨酸濃度1.0％，蔗糖濃度0.3M，酶濃度2mg/mL，酶解溫度37℃。改變高產(chǎn)菌株5-L25-1的氮源及