新型交聯(lián)酶聚體制備、性質(zhì)及生物催化應(yīng)用.pdf

1、本文以交聯(lián)酶聚體(CLEAs)為主要研究?jī)?nèi)容,開發(fā)了兩類CLEAs改進(jìn)技術(shù)。首先以青霉素G酰化酶為研究對(duì)象,制備得到了青霉素G?；窩LEAs,并對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究;針對(duì)CLEAs工業(yè)應(yīng)用中粒徑小,操作穩(wěn)定性差的缺陷,開發(fā)了新型CLEAs微球制備工藝,并將所得微球應(yīng)用于阿莫西林的酶法合成反應(yīng),獲得了較好的催化效果。其次,針對(duì)?-甘露聚糖酶CLEAs催化大分子底物傳質(zhì)效率低的缺陷,開發(fā)了大分子交聯(lián)劑以替代傳統(tǒng)的戊二醛,獲得了具有多孔結(jié)

2、構(gòu)的新型?-甘露聚糖酶CLEAs,提高了其對(duì)大分子多糖底物的催化效率。本文主要研究結(jié)論如下:
　　青霉素G?；窩LEAs的制備及應(yīng)用性質(zhì)研究:以青霉素G?；笧檠芯繉?duì)象,制備了PGA-CLEAs,其最優(yōu)制備條件:沉淀劑為飽和硫酸銨、沉淀劑與純酶液的體積比為2.3:1、交聯(lián)劑為戊二醛、交聯(lián)劑濃度為0.35％、交聯(lián)時(shí)間為2h,最終制得的PGA-CLEAs酶活保留為30.1%。PGA-CLEAs的最適溫度及pH值較游離酶均有所提高。<

3、br>　　青霉素G?；窩LEAs熱失活動(dòng)力學(xué)研究:青霉素G?；附?jīng)CLEAs技術(shù)固定后,熱失活模型由一步失活變?yōu)槎嗖竭B串失活,且每步失活反應(yīng)活化能均較游離酶明顯降低,解釋了CLEAs比游離酶熱穩(wěn)定性明顯提高的原因。
　　青霉素G?；窩LEAs微球制備及性質(zhì)研究:以增大CLEAs粒徑,提高可操作性與穩(wěn)定性為目的,開發(fā)了海藻酸鈣-二氧化硅(ALG-SiO2)包埋CLEAs微球,其最佳制備條件:固化劑氯化鈣濃度15mg/mL、固化時(shí)

4、間40min;與海藻酸鈣、殼聚糖、海藻酸鈣-殼聚糖三類微球?qū)Ρ?其形貌規(guī)則、穩(wěn)定性高、重復(fù)利用效果好,是制備CLEAs微球的優(yōu)良載體。
　　青霉素G酰化酶CLEAs微球在阿莫西林合成中的應(yīng)用:將ALG-SiO2微球應(yīng)用于阿莫西林合成反應(yīng)中,確定最優(yōu)反應(yīng)條件:溫度為25℃,pH為6.5,底物配比HPGM:6-APA=3:1,反應(yīng)時(shí)間為75h,最終得到的阿莫西林收率為55.2%。當(dāng)該微球重復(fù)利用四次后,其收率仍可達(dá)到最初收率的85%以