乳與乳制品中主要乳清蛋白組分的定量分析檢測方法研究.pdf

1、乳清蛋白作為蛋白質(zhì)源和他特有的生物學(xué)功能，被廣泛應(yīng)用于乳制品和配方食品中，在這些食品加工過程中一般會使用不同程度的熱處理。而這些熱處理過程不可避免地會導(dǎo)致乳清蛋白主要功能性組分α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳鐵蛋白等發(fā)生變性，其變性程度在很大程度上依賴于熱處理的時間和溫度。熱處理變性導(dǎo)致乳清蛋白中的生物活性性組分的活性損失甚至喪失，因而會影響人體對乳制品中α-乳白蛋白等主要功能性乳清蛋白組分的生物利用率?，F(xiàn)有的檢測方法由于操作繁瑣檢測周期

2、長，且分離度較差不能準(zhǔn)確定量，無法對產(chǎn)品中的乳清蛋白組分進(jìn)行有效準(zhǔn)確的評價。因此有必要建立分別可以檢測主要功能性乳清蛋白組分的方法，為準(zhǔn)確評價乳制品中有效營養(yǎng)價值提供參考依據(jù)和準(zhǔn)確的檢測方法。
　　 本課題應(yīng)用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，建立了分別檢測乳與乳制品中非變性α-乳白蛋白和非變性β-乳球蛋白的方法，兩個方法分別以人乳α-乳白蛋白作為內(nèi)標(biāo)和空白基質(zhì)加標(biāo)進(jìn)行定量以盡可能降低基質(zhì)干擾的影響，分別為以0.1％三氟乙酸水溶液/乙

3、腈溶液作為流動相，經(jīng)梯度洗脫后，進(jìn)入質(zhì)譜采用選擇區(qū)間掃描方式進(jìn)行定量檢測。其各自的選擇掃描區(qū)間分別為α-牛乳白蛋白：2357-2368 m/z；人乳α-乳白蛋白內(nèi)標(biāo)：2340-2350 m/z；β-牛乳球蛋白A：1525-1535 m/z；β-牛乳球蛋白B：1518-1528m/z。在2-50μg/mL濃度范圍內(nèi)，兩個方法都具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均>0.999，兩個方法在高、中、低三個濃度水平，其平均回收率分別為95.33-98.

4、67%(RSD%<6.41)、95.14-98.15%(RSD%<7.64)和94.28-98.70%(RSD%<4.53)。將其應(yīng)用于實際樣品檢測以進(jìn)一步檢驗所建立方法的適用于與有效性結(jié)果表明，所建立的方法可適用于嬰幼兒食品和乳制品中非變性牛乳α-乳白蛋白和牛乳β-乳球蛋白A和牛乳β-乳球蛋白B的定量測定。
　　 本研究建立了在肽水平上分別用于檢測總α-乳白蛋白、總牛乳鐵蛋白和總牛乳β-乳球蛋白的方法。將三種蛋白分別用牛胰蛋白

5、酶酶解后，選擇優(yōu)化其各自的特異標(biāo)簽肽，設(shè)計合成適當(dāng)?shù)膬?nèi)標(biāo)物，使其具有與蛋白本身相似的酶解效率和色譜質(zhì)譜行為。通過蛋白與標(biāo)簽肽之間的等摩爾定量關(guān)系，實現(xiàn)在肽水平上對蛋白進(jìn)行準(zhǔn)確定量，并對所建立的方法分別進(jìn)行了方法學(xué)驗證，三個方法的平均回收率分別在95.8-100.6%(RSD%<5.1%)、92.04-100.67(RSD%<8.6%)和92.04-109.91%(RSD%<11.2%)之間。將其應(yīng)用于實際樣品檢測以進(jìn)一步檢驗其適用于與有