生鮮乳及乳制品中甾類激素殘留分析方法研究.pdf

1、牛奶及其相關(guān)乳制品中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如各類蛋白質(zhì)、微量元素、多種維生素、鈣類以及其它人體所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因而受到大眾群體的喜愛，尤其是對(duì)處于嬰幼兒及學(xué)齡期的孩子。但近年來屢次發(fā)生的乳品質(zhì)量安全事件，不僅危害了消費(fèi)者的利益，還造成奶農(nóng)的巨大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重危害了我國(guó)奶業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。2013年發(fā)生的圣元奶粉導(dǎo)致嬰幼兒性早熟事件，再次將乳品質(zhì)量安全，特別是激素殘留水平提到新的認(rèn)識(shí)高度?？茖W(xué)的合理評(píng)估乳及乳制品中激素殘留水平對(duì)保障我國(guó)奶

2、業(yè)健康發(fā)展至關(guān)重要。甾類激素作為人體內(nèi)痕量存在的物質(zhì)，對(duì)人類健康具有舉足輕重的作用，缺少和超量都會(huì)影響身體健康。本研究以13種甾類激素為目標(biāo)物質(zhì)，分別建立了乳品中甾類激素高效液相色譜法及超高效液相色譜串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜法。利用建立的分析方法測(cè)定了生鮮牛乳及乳制品中甾類激素殘留。論文主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下：
　　（1）建立了生鮮牛乳及奶粉中4種雌激素（17β-雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚）的高效液相色譜分析方法。該方法用QuEChE

3、RS方法萃取，乙腈提取并沉淀蛋白質(zhì)，正己烷除脂，氨基固相萃取柱（SPE）凈化，反相色譜柱C18柱分離，最后紫外230nm處測(cè)定。該方法對(duì)生鮮牛乳及奶粉中17β-雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚的檢出限（以S/N=3計(jì)）分別為0.03、0.026、0.03、0.012mg/kg和0.024、0.021、0.025、0.01mg/kg。定量限（以S/N=10計(jì)）分別為0.1、0.09、0.1、0.04 mg/kg和0.07、0.07、0.08

4、、0.03mg/kg；在0.1、1.0、2.0 mg/kg三個(gè)濃度水平進(jìn)行添加，平均回收率在81％-97%的范圍內(nèi)，RSD值在3.2%-8.7%之間。
　　（2）對(duì)QuEChERS方法中提取和凈化條件進(jìn)行了優(yōu)化：質(zhì)譜分析易受基質(zhì)效應(yīng)的影響，因此提取和凈化條件非常重要。本研究比較了甲醇、乙腈、乙酸乙酯和丙酮的提取效果，結(jié)果表明，乙腈的提取效果最好，回收率最高，且牛乳中的蛋白質(zhì)可以得到有效沉淀。因此確定乙腈為提取劑。深入探討了三種填料

5、PSA、GCB和酸性氧化鋁對(duì)樣品回收率和基質(zhì)效應(yīng)的影響，以優(yōu)化凈化條件，選擇無水硫酸鎂900mg、PSA150mg、酸性氧化鋁200mg，由此可得最優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　?。?）建立了生鮮乳中13種甾類激素（17β-雌二醇、雌三醇、雌酮、己烯雌酚、醋酸美倫孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、去氫睪酮、去氫甲睪酮、19-去甲睪酮、睪酮、表睪酮、孕酮）的UPLC-Q-TOF-MS的分析方法。采用優(yōu)化后的QuEChERS方法對(duì)生鮮乳樣品中的甾

6、類激素提取及凈化。經(jīng)ACQUITY UPLC BEH C18（2.1×100mm1.7μm）色譜柱分離，采用電噴霧離子源正、負(fù)離子模式分別掃描，13種甾類激素在0.001-0.5mg/kg具有良好的線性關(guān)系；該方法對(duì)生鮮乳中13種甾類激素的檢出限為0.07μg/kg-0.51μg/kg（S/N=3）；定量限（S/N=10）為0.23μg/kg-1.7μg/kg。應(yīng)用基質(zhì)外標(biāo)法測(cè)定13種甾類激素的添加回收率和精密度，平均回收率為71.2%

7、-121.6%，RSD為2.3%-18.6%。建立了13種甾類激素質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，得到了子離子碎片結(jié)構(gòu)，便于陽性樣品的進(jìn)一步確證。
　?。?）不同地區(qū)不同季節(jié)生鮮乳及市場(chǎng)上乳制品中中甾類激素含量水平的分析及對(duì)比：2013年至2015年，每年于春、夏、秋、冬四個(gè)季度分別在山東省濰坊市、四川省成都市、陜西省西安市采集30份生鮮牛乳和生鮮羊乳樣品，廣西省南寧市采集30份生鮮水牛乳樣品。使用前述方法分析樣品中甾類激素的含量水平。結(jié)果表明，孕酮

8、在生鮮牛乳和生鮮水牛乳中檢出較高，平均檢出率為90.2%，含量范圍為未檢出～9.06μg/kg。生鮮羊乳平均檢出率為74.2%，含量范圍為未檢出～6.36μg/kg。雌酮在生鮮牛乳和生鮮水牛乳中檢出較低，均低于40%，含量范圍為未檢出～4.13μg/kg。其它甾類激素均未檢出。夏冬季的生鮮牛乳樣品當(dāng)中孕酮含量略高于春秋季；地域?qū)ιr乳當(dāng)中的甾類激素的水平含量的影響并不大，各省份的孕酮含量差異在1μg/kg左右。選取六種市場(chǎng)上常見品牌的直