冠突散囊菌產(chǎn)色素類物質的初步研究.pdf

1、茯磚茶的茶湯呈現(xiàn)透亮的橙紅色，具有降血脂血糖、減肥助消化及抗氧化等保健功效。冠突散囊菌是茯磚茶發(fā)花過程中形成的優(yōu)勢菌株，其代謝產(chǎn)物種類繁多，有色素類、胞外多糖類、酶類、氨基酸類等，前期實驗研究發(fā)現(xiàn)，色素類物質具有一定的生理活性，因此具有很高的研究價值。
　　本研究以陜西茯磚茶中提取的冠突散囊菌為菌種，采用麩皮對其進行固體培養(yǎng)，通過超聲輔助提取等方法對冠突散囊菌色素進行提取并對提取條件進行優(yōu)化，通過TLC、HPLC等方法對提取出的色

2、素進行分離純化，利用紫外、紅外光譜等方法對其結構進行初步探究，從而推測出可能的色素類型，為藥品和保健食品的開發(fā)奠定基礎。本研究的內(nèi)容和結果如下:
　　1.在冠突散囊菌固體培養(yǎng)工藝條件優(yōu)化的基礎上，考察了菌體生長期間代謝產(chǎn)物中黃色素產(chǎn)量的變化情況，結果表明:黃色素代謝產(chǎn)物的變化趨勢為先升高，后降低，固體培養(yǎng)至第五天時，冠突散囊菌代謝的黃色素產(chǎn)量最大。
　　2.以石油醚為最佳提取溶劑，優(yōu)化了超聲輔助提取法和有機溶劑浸提法的工藝條

3、件，結果如下，超聲輔助提取法的最佳提取工藝為:料液比1∶20，溫度50℃，時間20min。最高得率可達1.34％左右。有機溶劑浸提法的最佳提取工藝為:料液比1∶30，溫度60℃，時間1h。最高得率可達0.83％左右。結果表明:超聲輔助提取法所用時間短，提取效率高，減少了一些非目標物質的溶出，極大降低了雜質的干擾，提取效果明顯優(yōu)于有機溶劑浸提法。
　　3.利用薄層色譜、高效液相色譜等方法對冠突散囊菌色素提取液進行分離純化。
　

4、　(1)選擇了16種不同極性的展開劑對冠突散囊菌色素提取濃縮液中的成分進行初步分離，結果表明:展開劑石油醚∶乙酸乙酯=1∶1(v/v)能分離出兩個主要斑點，分別是Rf值為0.882的黃色斑點和Rf值為0.776的紅色斑點。分離效果的重現(xiàn)性良好，且兩個斑點的Rf值相差比較大，有利于黃色斑點的收集，將收集到的黃色斑點記為黃色素。
　　(2)將上述黃色斑點即黃色素收集后，利用展開劑石油醚∶丙酮=9∶1(v/v)對其進行二次分離，結果表明

5、:展開劑石油醚∶丙酮=9∶1(v/v)能將黃色素再次分開為三個主要斑點，其Rf值分別為0.513、0.462、0.423，分離效果的重現(xiàn)性良好，且三個斑點的Rf值相差比較大，有利于三種組分的分開收集，收集到的三種組分分別記為:黃色素組分Ⅰ、黃色素組分Ⅱ、黃色素組分Ⅲ。
　　(3)采用高效液相色譜法對黃色素組分Ⅰ、黃色素組分Ⅱ、黃色素組分Ⅲ進行進一步的分離，結果表明:黃色素組分Ⅰ在流動相甲醇∶水=90∶10(v/v)的洗脫下，分離圖

6、譜上出現(xiàn)了1個主要物質峰，其保留時間為15.651min;黃色素組分Ⅱ在流動相甲醇∶水=95∶5(v/v)的洗脫下，分離圖譜上出現(xiàn)了2個主要物質峰，其保留時間分別為6.69min、16.296min;黃色素組分Ⅲ在流動相甲醇∶水=95∶5(v/v)的洗脫下，分離圖譜上同樣出現(xiàn)了2個主要物質峰，其保留時間分別為6.605min、15.038min。
　　4.利用薄層色譜、紫外-可見光譜、紅外光譜等方法對黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素

7、、苯甲酸三種對照品進行對比性探究，推測黃色素的結構類型。
　　(1)利用薄層色譜法，將黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素對照品進行對比性驗證，展開劑為石油醚∶丙酮=3∶1，結果表明:番茄紅素的Rf值為0.923，β-胡蘿卜素對照品的R值為0.962，黃色素樣品斑點的Rf值集中在0.610左右，由此可知，三者的Rf值有明顯的差別，因此推測黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素不是同一類物質。
　　(2)利用紫外-可見光譜法在300-600

8、nm范圍內(nèi)進行波長掃描，對黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素、苯甲酸三種對照品進行對比性驗證，結果表明:番茄紅素有三個特征吸收峰，分別為444nm、470nm、502nm;β-胡蘿卜素有兩個特征吸收峰，分別為450nm、478nm;苯甲酸有兩個特征吸收峰，分別為285nm、388nm;黃色素有一個特征吸收峰為398nm，其中的黃色素組分Ⅰ有一個特征吸收峰為389nm，黃色素組分Ⅱ有兩個特征吸收峰，分別為330nm、390nm，黃色素組分Ⅲ有

9、兩個特征吸收峰，分別為330nm、397nm。其中黃色素組分Ⅰ、Ⅱ分別在389nm、390nm處的吸收峰與苯甲酸在388nm處的吸收峰基本吻合，因此推測黃色素與苯甲酸含有相同的官能團，此處的特征吸收峰可能是由苯樣結構所引起的。
　　(3)利用紅外光譜法對黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素、苯甲酸三種對照品進行對比性驗證，結果表明:番茄紅素含有的官能團有C=C、-CH2-、-CH3;β-胡蘿卜素含有的官能團有C-H、C=C、-CH3、-