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文檔簡(jiǎn)介
1、背景和目的:乙型肝炎病毒(HBV)共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(HBVcccDNA)、組蛋白和非組蛋白共同作用組裝成病毒微染色體。視黃醇X受體α(RXRα)是作為一種肝細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子,參與了HBV復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。本研究致力于在RXRα已被證實(shí)與病毒復(fù)制具有直接相關(guān)的基礎(chǔ)上探索其是否并如何參與到HBVcccDNA微染色質(zhì)重塑,期望對(duì)新型抗病毒藥物的研究提供一些理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
方法:線性HBV全長(zhǎng)基因組DNA轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,建立HB
2、V非載體細(xì)胞復(fù)制模型;與RXRα真核表達(dá)質(zhì)粒(pRs-hRXRα)和shRNA載體分別共轉(zhuǎn)染建立RXRα高表達(dá)及基因沉默HBV復(fù)制系統(tǒng)。在三種不同系統(tǒng)下,采用HBVcccDNA染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)技術(shù)聯(lián)合實(shí)時(shí)定量PCR方法,進(jìn)行RXRα依賴的HBV復(fù)制與病毒微染色質(zhì)重塑的相關(guān)性探索。
結(jié)果:
(1)線性HBV全長(zhǎng)基因組DNA轉(zhuǎn)染后成功啟動(dòng)了HepG2細(xì)胞內(nèi)完整的HBV復(fù)制與轉(zhuǎn)錄活動(dòng),表明了HBV非載體細(xì)胞復(fù)制模
3、型的成功建立。
(2) RXRα直接結(jié)合到HBV微染色質(zhì)上從而對(duì)病毒復(fù)制與轉(zhuǎn)錄活動(dòng)發(fā)揮重要的調(diào)控作用。
(3) HBV cccDNA微染色質(zhì)中檢測(cè)到組蛋白招募和乙酰化的動(dòng)態(tài)變化。
(4) RXRα基因過(guò)表達(dá)及基因沉默直接影響了HBV微染色質(zhì)中組蛋白結(jié)合及其乙?;?,且與HBV復(fù)制明顯相關(guān)。
結(jié)論:我們的研究證實(shí)了RXRα對(duì)HBV體外復(fù)制活動(dòng)的調(diào)控作用以及對(duì)HBV微染色質(zhì)重塑的重要影響,對(duì)于作用于
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