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1、目的:輔酶Ⅱ依賴性視黃醇脫氫/還原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR)是黃東陽等于1997年在兔肝細胞中發(fā)現(xiàn)并純化的一種新的催化視黃醇氧化/還原反應(yīng)的脫氫酶,其參與維甲酸在體內(nèi)的第一步代謝反應(yīng).NRDR對視黃醇有很高的底物特異性與親和性,酶活性也遠大于迄今所報道的乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase,ADH)與細胞微粒體短鏈脫氫/還原酶(short
2、-chain dehydrogenase/reductase,SDR)類,其活性在其它哺乳動物肝中也普遍存在,但以兔肝臟為最高.兔與小鼠的NRDRcDNA相近,全長約為1200bp,人的NRDR cDNA全長約為1300bp,三者編碼區(qū)均為783 bp,均編碼260個氨基酸,已相繼被克隆登錄[AB045133][BC003484][AB045131],但人肝臟NRDR尚未在蛋白水平鑒定活性.該研究通過克隆人肝組織中NRDR及其剪接體(s
3、NRDR)全長cDNA,分析其核苷酸序列與氨基酸序列的結(jié)構(gòu)特征,并進行蛋白表達,探討NRDR及其剪接體(sNRDR)的生物學(xué)活性及催化反應(yīng)特性,為研究肝臟中維甲酸代謝提供理論依據(jù).結(jié)論:1.從人肝臟中克隆了NRDR的新的剪切體sNRDR的全長cDNA.sNRDR在人正常組織中普遍存在.在正常成人組織中sNRDR和NRDR共表達,但在胎兒組織中以sNRDR的表達為主.2.人肝臟NRDR具有視黃醇還原酶活性.建立的NRDR蛋白表達體系高效簡
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