黃曲霉毒素B1在基于DNA修飾金電極界面上的電化學(xué)生物傳感.pdf

1、黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1, AFB1),被世界衛(wèi)生組織列為Ⅰ類(lèi)致癌物的毒素,它的危害已經(jīng)危及到了全世界人民的公共安全,世界各國(guó)也都已經(jīng)在關(guān)注 AFB1的污染問(wèn)題。各國(guó)都制訂了針對(duì)各國(guó)不同國(guó)情的規(guī)章制度,以限定 AFB1在食品及動(dòng)物飼料中的含量。同時(shí),各國(guó)的科研工作者也都在為研究更快,更簡(jiǎn)易的AFB1檢測(cè)設(shè)備以及檢測(cè)方法。
　　本論文的主要工作包括:
　　1. AFB1單克隆抗體修飾金電極制備AFB1免疫傳感器

2、
　　制備了快速檢測(cè)黃曲霉毒素B1的黃曲霉毒素B1抗體@納米金修飾金電極電化學(xué)傳感器單元。實(shí)驗(yàn)選用循環(huán)伏安法(CV)和示差脈沖伏安法(DPV)研究黃曲霉毒素B1在修飾電極上的電化學(xué)響應(yīng),確定了該傳感器測(cè)定黃曲霉毒素B1的最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件(黃曲霉毒素B1單克隆抗體的最適修飾條件為4℃、8 h,PBS緩沖溶液的最適pH值為7.4),建立了測(cè)定黃曲霉毒素B1的電化學(xué)方法,其線(xiàn)性方程為:i(μA)=0.02166 C+18.8682,線(xiàn)性相關(guān)

3、系數(shù)R=0.9997;線(xiàn)性檢測(cè)范圍為1.427~150 ng mL-1,對(duì)不同豬飼料樣品檢測(cè)的加標(biāo)回收率在94.44~101.36％。
　　2.基于電化學(xué)ssDNA損傷傳感對(duì)飼料中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)
　　構(gòu)建了一種快速、簡(jiǎn)便、價(jià)廉的檢測(cè)黃曲霉毒素 B1(AFB1)的新型電化學(xué)DNA生物傳感器,實(shí)現(xiàn)對(duì)AFB1的快速檢測(cè)。試驗(yàn)中采用電化學(xué)方法為分析方法,對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化,并據(jù)最優(yōu)化條件建立了標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、檢測(cè)樣品。試驗(yàn)最終得出的

4、最優(yōu)化條件為:ssDNA于4℃下在裸電極上自組裝14 h,ssDNA-Au電極與cDNA的雜交時(shí)間為2 h,然后得到dsDNA-Au電極,以60μM亞甲基藍(lán)(Methylene blue, MB)為電化學(xué)活性指示劑,pH=7.0,0.2 M磷酸鹽緩沖溶液(PBS)配制的鐵氰化鉀溶液為緩沖底液,不同濃度的AFB1對(duì)電極的損傷時(shí)間為9 min,不同濃度的AFB1對(duì)電極的損傷溫度為37℃。該方法對(duì)AFB1的線(xiàn)性檢測(cè)范圍為21.839~800

5、ng mL-1,加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的回收率在98.34%~101.68%。建立的電化學(xué)DNA損傷方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)AFB1快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的定量檢測(cè)。
　　3.基于電化學(xué)dsDNA損傷傳感對(duì)飼料中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)
　　構(gòu)建了一個(gè)以亞甲基藍(lán)為電活性指示劑的電化學(xué)DNA檢測(cè)系統(tǒng)。將巰基修飾的dsDNA固定在金電極上,通過(guò)探討dsDNA在金電極表面的自組裝、MB及黃曲霉毒素濃度對(duì)響應(yīng)信號(hào)的影響等,討論了傳感體系的檢測(cè)限及特異性。將固定好

6、dsDNA的金電極與黃曲霉毒素B1的溶液進(jìn)行反應(yīng),由于黃曲霉毒素B1與DNA的相互作用,通過(guò)與黃曲霉毒素B1反應(yīng)前后電信號(hào)的變化,可以確定目標(biāo)溶液中黃曲霉毒素B1的量。在對(duì)MB的濃度、反應(yīng)底液的pH值以及溫浴的時(shí)間和溫度等優(yōu)化后的條件下,黃曲霉毒素B1的濃度在12.458~500 ng mL-1范圍時(shí),經(jīng)AFB1損傷前后的峰電流差值與lg(CAFB1)之間的關(guān)系滿(mǎn)足線(xiàn)性關(guān)系,線(xiàn)性相關(guān)系數(shù) R=0.9970,加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的回收率在95.9