Sorangium cellulosum So0157-2中木聚糖酶的定位研究.pdf

1、纖維堆囊菌能夠利用自然界中豐富的纖維素、半纖維素資源，在結(jié)晶性纖維素（濾紙）的無(wú)機(jī)鹽平板上能夠接觸生長(zhǎng)，木聚糖作為半纖維素的主要組成成分，也可以作為纖維堆囊菌的唯一碳源。
　　通過(guò)已測(cè)序的基因組的分析發(fā)現(xiàn)，So0157-2具有完整的木聚糖降解酶系，包括內(nèi)切木聚糖酶、木糖苷酶、酯酶、以及側(cè)鏈水解酶，其中，至少有22個(gè)來(lái)自不同家族的內(nèi)切木聚糖酶，散布在基因組中，對(duì)其模塊結(jié)構(gòu)的分析顯示，這些木聚糖酶表現(xiàn)出新穎的性質(zhì)，與纖維小體策略以及游

2、離酶策略中的模塊結(jié)構(gòu)均不相同，尤其是含有較多的脂蛋白，推測(cè)纖維堆囊菌以一種細(xì)胞結(jié)合型非游離酶組分方式降解木聚糖，而對(duì)這些木聚糖酶的定位，是確定這種降解方式的基礎(chǔ)。
　　利用不同碳源的三種培養(yǎng)基(M26、G-CNST、X-CNST)培養(yǎng)So0157-2，進(jìn)行組分分離，初步得到了胞外游離組分、膜組分、細(xì)胞內(nèi)可溶組分，酶活檢測(cè)顯示，這三種組分中均具有木聚糖酶酶活，并且，膜組分的木聚糖酶活性占總木聚糖酶酶活的50％以上，在So0157-2

3、利用木聚糖過(guò)程中起著重要作用。
　　我們選擇從胞外蛋白入手，試圖通過(guò)活性電泳的方法，在胞外鑒定到木聚糖酶，嘗試了直接濃縮法、雙向酶譜法、最終選擇硫酸銨沉淀加活性電泳的方法，在三種培養(yǎng)基的胞外鑒定到4個(gè)目的蛋白，其中三個(gè)內(nèi)切木聚糖酶，以及一個(gè)底物結(jié)合域。在M26培養(yǎng)基的胞內(nèi)組分中，鑒定到2個(gè)內(nèi)切木聚糖酶。其中木聚糖酶7384被多次被鑒定到，這個(gè)來(lái)自GH10家族的酶在木聚糖的降解中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。
　　由于脂蛋白在酶系中所

4、占很高比例，我們選擇其中的Xyn11B進(jìn)行研究，預(yù)測(cè)該酶具有典型的脂蛋白信號(hào)肽特征，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道推測(cè)其定位在內(nèi)膜或者外膜上，由于在本源菌中眾多的免疫交叉干擾，我們將其在大腸桿菌中進(jìn)行異源表達(dá)，構(gòu)建了全長(zhǎng)蛋白的表達(dá)菌株BL21-pET-22b-Xyn11B，以及去掉信號(hào)肽后剩余序列的表達(dá)菌株BL21-pET-22b-Xyn11B-dlp，通過(guò)酶活以及Westernblot檢測(cè)到蛋白成功表達(dá)，為后續(xù)研究蛋白定位提供基礎(chǔ)。
　　纖維堆囊