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文檔簡介
1、呋喃唑酮及其代謝物AOZ具有很強的毒性,易對人體健康造成危害,許多國家已將呋喃唑酮列為禁用藥物,且不能在動源性食品中檢測出呋喃唑酮及其代謝物AOZ。目前食品安全事件頻發(fā),仍有不法商販繼續(xù)使用呋喃唑酮,呋喃唑酮在動物體內(nèi)迅速代謝為標(biāo)志物AOZ,因此對畜禽產(chǎn)品中AOZ準(zhǔn)確檢測顯得至關(guān)重要。目前AOZ殘留的檢測多采用儀器分析法,雖然準(zhǔn)確性和靈敏度高,但是一般需要昂貴的大型儀器和專業(yè)技術(shù)人員,且檢測過程繁瑣,時間長,檢測成本高,使其無法滿足對樣
2、品大量快速篩查。因此,建立一種快速、靈敏的AOZ殘留檢測技術(shù)具有重要意義。本實驗建立了AOZ殘留檢測的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和化學(xué)酶免疫法(CLEIA)。
首先,要對AOZ進(jìn)行衍生化,利用對醛基苯甲酸將AOZ衍生化為半抗原CPAOZ。然后利用活化酯法分別將CPAOZ與卵清蛋白(OVA)和辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián),合成包被原CPAOZ-OVA和酶標(biāo)抗原CPAOZ-HRP。
其次,對包被抗原與抗體稀釋倍數(shù)、封閉
3、液、競爭時間、二抗稀釋倍數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,分別建立了AOZ間接競爭CLEIA法和間接競爭ELISA法。
然后,對包被抗體與酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù)、封閉液、競爭時間進(jìn)行優(yōu)化,分別建立了AOZ的直接競爭CLEIA法和直接競爭ELISA法。
最后對四種方法進(jìn)行方法評估,結(jié)果表明,間接競爭CLEIA法的IC50值為0.74ng/mL,對牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為84.5%-97.8%,最低檢測限為0.028ug/kg。直接競爭CLE
4、IA法的IC50值為2.45ng/mL,對牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為83.9%-93.5%,最低檢測限為0.042ug/kg。間接競爭ELISA法的IC50值為1.096ng/mL,對牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為87.4%-102.7%,最低檢測限為0.225ug/kg。直接競爭ELISA法的IC50值為2.511ng/mL,對牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為84.5%-104.0%,最低檢測限為0.253ug/kg。四種方法除了對
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