豆粕中堿性多肽的分離提取及抑菌特性的研究.pdf

1、本文以低溫脫脂豆粕為原料，首先利用等電點(diǎn)法提取大豆球蛋白，將大豆球蛋白經(jīng)葡聚糖凝膠層析純化，然后再從純化的大豆球蛋白中提取大豆球蛋白堿性多肽（SGBP），通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)研究提取大豆球蛋白堿性多肽的最優(yōu)提取條件，得到試驗(yàn)需要的SGBP。然后用提取的SGBP研究其對金黃色葡萄球菌的抑菌活性和抑菌機(jī)理。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　?。?）根據(jù)等電點(diǎn)沉淀原理，研究從低溫脫脂豆粕中提取大豆球蛋白。分別將大豆球蛋白提取液的 pH調(diào)為6.0

2、，6.2，6.4，6.6和6.8進(jìn)行冷卻沉淀，采用Sephadex G150進(jìn)行純化，得出提取大豆球蛋白最佳pH值為6.4。
　?。?）采用純化后的大豆球蛋白提取 SGBP。利用β-巰基乙醇使連接大豆球蛋白酸性多肽和堿性多肽的二硫鍵斷開，根據(jù)酸性多肽和堿性多肽等電點(diǎn)的不同分離純化SGBP。研究料液比，水浴溫度，水浴時(shí)間和pH對SGBP提取條件的影響。設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)分析SGBP的最優(yōu)提取條件。由單因素試驗(yàn)得出：最佳料液比為1:25；最

3、佳提取溫度為70℃；最優(yōu)提取時(shí)間為45min；最佳提取pH為8.25。由正交試驗(yàn)和驗(yàn)證試驗(yàn)得出：最優(yōu)的試驗(yàn)組合為提取溫度為70℃，提取時(shí)間為30min，提取液的pH為8.25。
　　（3）采用牛津杯實(shí)驗(yàn)和分光光度法檢測SGBP對金黃色葡萄球菌抑菌活性和最小抑菌濃度。采用菌落計(jì)數(shù)法研究 SGBP對金黃色葡萄球菌的動力學(xué)的研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：SGBP的最小抑菌濃度為50μɡ/ml，最佳抑菌濃度為200μɡ/ml；而且 SGBP對金黃色

4、葡萄球菌的抑菌效果隨著作用時(shí)間和濃度的增加而增強(qiáng)。
　　（4）通過吸光度法測定SGBP處理后的金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁的變化，結(jié)果表明：對比實(shí)驗(yàn)組（用SGBP處理）與陰性對照組（用磷酸鹽緩沖液處理）的OD630沒有顯著差別，說明SGBP對金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁沒有作用；通過結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)，電導(dǎo)率和離子泄漏分析測定SGBP對金黃色葡萄球菌細(xì)胞膜通透性的影響，結(jié)果表明：結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)中，隨著濃度的增大，OD590也隨之增大；隨著處理時(shí)間的增長，電