大豆堿性多肽對大腸桿菌的抑菌機(jī)制及應(yīng)用研究.pdf

1、食品營養(yǎng)豐富，極易受到微生物的污染，導(dǎo)致腐敗變質(zhì)。通常情況下，人們采用添加防腐劑的方法來防止食品腐敗，但隨著生活水平的提高和消費(fèi)者對健康的追求，加之化學(xué)防腐劑多少都有一定的毒害作用，所以人們已開始轉(zhuǎn)向天然防腐劑的開發(fā)。從大豆中純化的堿性多肽成為天然防腐抗菌劑開發(fā)的研究熱點(diǎn)之一。
　　本課題探究了純化的堿性多肽對大腸桿菌的抗菌效果，并研究了堿性多肽對細(xì)胞膜的作用及其細(xì)胞膜成分的相互反應(yīng)。此外，還進(jìn)一步將堿性多肽應(yīng)用到食品防腐中，探究

2、了堿性多肽對牛乳感官特性及理化指標(biāo)的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　(1)通過菌落計(jì)數(shù)及牛津杯的實(shí)驗(yàn)方法發(fā)現(xiàn)，GBP對大腸桿菌有明顯的抑制作用,且GBP的抑菌效果和濃度呈現(xiàn)正相關(guān)，當(dāng)GBP濃度為200μg/ml時(shí)，抑菌效果最好。原子力顯微鏡觀察到GBP能明顯破壞大腸桿菌的細(xì)胞形態(tài)，使細(xì)胞表面出現(xiàn)明顯的不規(guī)則褶皺和凹槽，隨著時(shí)間的延長，GBP對大腸桿菌的破壞性逐漸增大，8小時(shí)后細(xì)胞結(jié)構(gòu)完全塌陷。
　　(2)在探究GBP對大腸桿菌細(xì)胞

3、膜的作用機(jī)制時(shí)，主要研究了大腸桿菌細(xì)胞的表面疏水性，堿性磷酸酶的泄露以及細(xì)胞外膜、內(nèi)膜的通透性。當(dāng)200μg/ml GBP處理大腸桿菌時(shí)，能夠暴露細(xì)胞表面疏水端，增大大腸桿菌的細(xì)胞表面疏水性；隨著時(shí)間的增加，位于細(xì)胞周質(zhì)空間的堿性磷酸酶泄露量也逐漸增加，說明GBP對大腸桿菌的細(xì)胞膜有明顯的破壞作用；GBP處理大腸桿菌后，GBP能破壞大腸桿菌外膜，增加外膜通透性，進(jìn)而增加GBP對利福平、紅霉素的敏感性；能明顯增加大腸桿菌內(nèi)膜的通透性，從而

4、使鄰硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷立即進(jìn)入細(xì)胞，與細(xì)胞內(nèi)的β-半乳糖苷酶反應(yīng)生成黃色的鄰-硝基苯酚，且GBP濃度越高，大腸桿菌內(nèi)膜通透性越大。
　　(3)在研究GBP對大腸桿菌細(xì)胞膜成分的作用機(jī)制時(shí)，通過GBP的抑菌濃度動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對于GBP的處理，大腸桿菌原生質(zhì)體比菌體更敏感，GBP對大腸桿菌原生質(zhì)體的最小抑菌濃度為25μg/ml，明顯低于大腸桿菌的最小抑菌濃度（200μg/ml）。還原糖的泄露發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間和GBP濃度的增加，還

5、原糖泄露量明顯增加。200μg/ml GBP處理大腸桿菌后，GBP能夠引起大腸桿菌外膜脂多糖的泄露，并將大分子分解成小分子；能破壞細(xì)胞膜，在Triton X-114存在的條件下促進(jìn)膜蛋白的提取，而且濃度越高，對細(xì)胞膜的破壞性越大；能暴露有熒光性的Phe殘基，進(jìn)而增加細(xì)胞膜蛋白的熒光性，但200μg/ml的GBP足以將Phe殘基全部暴露出來。
　　(4)在對牛乳的保鮮效果研究中，與對照組相比，經(jīng)不同濃度的GBP處理后，對牛乳的感官特