基于激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移探針的單核苷酸多態(tài)性生物傳感研究.pdf

1、單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。SNP是引起常見(jiàn)疾病的突變類型之一，是人類可遺傳變異最常見(jiàn)的一種，SNP的研究已經(jīng)成為基因組時(shí)代的一個(gè)熱點(diǎn)。本論文基于DNA堿基缺失位點(diǎn)（AP位點(diǎn)）設(shè)計(jì)的熒光增強(qiáng)型SNP檢測(cè)方法具有快速，靈敏，背景低的優(yōu)點(diǎn)。在此基礎(chǔ)上，我們運(yùn)用含有脫堿基位點(diǎn)的DNA作為適配體實(shí)現(xiàn)了對(duì)天然黃酮類化合物簡(jiǎn)單

2、，快速的檢測(cè)。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　1.基于有機(jī)小分子探針—漆黃素的熒光增強(qiáng)型單核苷酸多態(tài)性識(shí)別研究
　　選擇可以在脫堿基位點(diǎn)（AP位點(diǎn)）發(fā)生激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移(ESIPT)的3-羥基黃酮類—漆黃素作為探針，建立了簡(jiǎn)單快速的熒光增強(qiáng)型SNP識(shí)別方法。在靶標(biāo)堿基對(duì)應(yīng)的探針鏈上引入AP位點(diǎn)有利于漆黃素ESIPT過(guò)程的發(fā)生，而ESIPT發(fā)生的效率則取決于AP位點(diǎn)對(duì)面的靶標(biāo)堿基。通過(guò)漆黃素對(duì)AP位點(diǎn)的選擇性結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)SNP識(shí)別。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:當(dāng)AP位點(diǎn)對(duì)面的靶標(biāo)堿基為胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)時(shí)表現(xiàn)出最強(qiáng)的熒光發(fā)射，而當(dāng)靶標(biāo)堿基為鳥嘌呤(G)和腺嘌呤(A)時(shí)的熒光發(fā)射要低得多。這種SNP識(shí)別方法可以高選擇性的區(qū)分嘧啶和嘌呤，而且這種對(duì)堿基的區(qū)分不受AP位點(diǎn)側(cè)翼堿基的影響。此方法的創(chuàng)新點(diǎn)在于實(shí)現(xiàn)了無(wú)標(biāo)記的熒光增強(qiáng)型SNP識(shí)別。
　　2.基于核酸脫堿基位點(diǎn)的適配體在天然黃酮類檢測(cè)方面的研究
　　采用含有脫堿基位點(diǎn)的DNA作為適配體，這種適配體對(duì)漆黃素

4、表現(xiàn)出高度的選擇性和靈敏度，而對(duì)其他種黃酮類物質(zhì)（桑色素，蘆丁，芹菜素，山奈酚，楊梅素，槲皮素，木犀草素，黃芩素，柚皮素，染料木素，白楊素以及高良姜素）均未表現(xiàn)出此特性。通過(guò)這種選擇特異性結(jié)合可以對(duì)漆黃素進(jìn)行快速的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:當(dāng)信噪比為3時(shí)，該檢出限可達(dá)50nM，我們此方法中所用的適配體不需要任何熒光基團(tuán)的修飾，因此，熒光背景是完全可以忽略不計(jì)的。
　　3.基于楊梅素對(duì)AP位點(diǎn)的靶向識(shí)別來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)AP位點(diǎn)的檢測(cè)
　　采

5、用3-羥基黃酮類中的另一種物質(zhì)—楊梅素作為探針，通過(guò)熒光穩(wěn)態(tài)，熒光瞬態(tài)，熒光共振能量轉(zhuǎn)移以及DNA熔點(diǎn)的測(cè)定等表征方法研究了楊梅素與AP位點(diǎn)的結(jié)合特性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在水溶液環(huán)境中，楊梅素幾乎不發(fā)熒光，而在加入AP-DNA后，熒光發(fā)射會(huì)有明顯的增強(qiáng)，此熒光發(fā)射的增強(qiáng)是由于3位羥基和4位羰基之間發(fā)生激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移過(guò)程產(chǎn)生了互變異構(gòu)體。最重要的是，與前面的漆黃素相比，它的熒光增強(qiáng)并不依賴于AP位點(diǎn)的側(cè)翼堿基。因此，楊梅素與AP位點(diǎn)這種