敵草隆免疫膠體金快速檢測試紙條的開發(fā).pdf

1、本論文優(yōu)化建立了敵草隆膠體金免疫層析試紙條的快速檢測技術(shù)，并有效用于水樣中敵草隆的快速篩選。
　　 敵草隆抗血清經(jīng)過protein A-scpharose4B以及KLH-sepharose4B親和層析純化，得到敵草隆的多克隆抗體，采用檸檬酸三鈉還原法和硼氫化鈉還原法分別制備不同粒徑的膠體金，經(jīng)透射電鏡鑒定粒徑分別為17 nm和6.56 nm，且均勻。將不同粒徑的膠體金分別標記多克隆抗體，將敵草隆包被抗原BSA-6C和羊抗兔二抗分

2、別包被在硝酸纖維素膜上作為檢測線和控制線，優(yōu)化建立了間接競爭檢測方法，即利用敵草隆與固相載體膜上的敵草隆-牛血清白蛋白(Diuron-BSA)偶聯(lián)物(即包被抗原)競爭結(jié)合金標記抗體，通過目視可快速定性判斷樣品中敵草隆殘留水平。優(yōu)化后的條件為：抗原包被量為0.24μg，金標抗體的稀釋倍數(shù)為1:2，羊抗兔二抗以1:500稀釋。
　　 敵草隆試紙條的方法檢出限為5 ng/mL，選取15種陰性水樣作為檢測樣品，分別添加5、20、100

3、ng/mL的敵草隆標準品，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后直接上樣檢測，經(jīng)試紙條和HPLC檢測，結(jié)果一致性較好，驗證了方法的準確性。
　　 課題進一步選擇滅草隆、綠谷隆、氯溴隆、利谷隆、塞苯隆五種敵草隆的結(jié)構(gòu)類似物，考察了它們對敵草隆試紙條檢測的干擾。在濃度為1000μg/L時，五種結(jié)構(gòu)類似物對敵草隆檢測均無明顯干擾，說明了敵草隆膠體金免疫層析試紙條的高特異性。
　　 論文所開發(fā)的膠體金試紙條無需檢測儀器，操作簡單，快速，1