恩諾沙星免疫膠體金快速檢測(cè)試紙條的研制.pdf

1、本論文優(yōu)化建立了恩諾沙星膠體金免疫層析分析方法，并有效用于動(dòng)物源性食品、環(huán)境樣品及動(dòng)物代謝物中恩諾沙星的快速檢測(cè)。
　　本研究利用混合酸酐法合成恩諾沙星包被原，將恩諾沙星抗血清經(jīng)proteinA-sepharose4B進(jìn)行純化，得到抗恩諾沙星多克隆抗體。采用檸檬酸三鈉還原法制備粒徑為17nm膠體金，通過(guò)一系列優(yōu)化，最終確定膠體金連接金標(biāo)抗體最適pH為9，最佳標(biāo)記1mg/mL恩諾沙星多克隆抗體用量為20μL。根據(jù)優(yōu)化用量標(biāo)記恩諾沙星

2、多克隆抗體，制得膠體金標(biāo)記抗體。以硝酸纖維素膜為固相載體，ENR-OVA(包被原)和羊抗兔二抗分別作為檢測(cè)線和控制線包被在硝酸纖維素膜上，金標(biāo)記抗體噴涂在玻璃纖維墊上，制成快速檢測(cè)恩諾沙星免疫層析試紙條。
　　建立了膠體金免疫層析分析方法，檢出限為5μg/L，在濃度為1000μg/L時(shí)，15種喹諾酮類藥物及8種常用獸藥對(duì)恩諾沙星免疫膠體金快速檢測(cè)均無(wú)明顯干擾，表明恩諾沙星膠體金免疫層析分析方法具有較高特異性。
　　選取牛奶、

3、豬肉、豬肝等9種動(dòng)物源性產(chǎn)品、池塘水及豬尿作為檢測(cè)樣品，分別添加5、20、100μg/L的恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的處理即可上樣檢測(cè)，牛奶、池塘水及豬尿樣品檢測(cè)限在5-25μg/L之間，其余動(dòng)物源性產(chǎn)品檢測(cè)限為50μg/kg，均低于最高殘留限量。所建立的恩諾沙星免疫層析分析方法與酶聯(lián)免疫分析方法的一致性較好，驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確性。
　　論文所開(kāi)發(fā)的膠體金試紙條無(wú)需檢測(cè)儀器，操作簡(jiǎn)單，快速，準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性高，可作為動(dòng)物性食品中恩